第八章 PCR技术和其应用.pptVIP

第八章 PCR技术及其用 PCR仪 PCR仪 1.PCR技术的原理 2. PCR的扩增步骤 PCR的反应程序P137 （3）第四步 延伸（extension） 温度循环 PCR　反应体系 ③引物的碱基序列 ④引物的碱基组成 3）避免形成引物二聚体（dimer） 4） 引物中的核苷酸序列与非靶DNA的核苷酸序列以及靶DNA中引物互补序列以外的核苷酸序列之间的相似性不得超过70%，并且不能有连续8个以上相同的核苷酸序列。 ⑤引物的Tm值 ⑧套嵌引物（nested primers) ② 最适温度高 ④ Taq DNA聚合酶的激活剂 第三类酶： 具有第一类酶的DNA聚合特性，不拥有第二类酶的逆转录功能，但是它们具有3’-5’方向的外切酶活性。 6. PCR的特点 （4）简便 二 A-T 克隆法 pCR2.1 pCR2.1的MCS pCR2.1-topo pCR1000 Promega 公司的T载体系列 T vector的克隆过程——简便！ 一 反向PCR P143 （2）12种锚定引物 （3）5’端的随机引物 （4）随机引物与锚定引物成对扩增 （5）随机-锚定引物PCR的产物电泳比较 实时荧光定量PCR的定量方式 在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念—Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含