铜绿假单胞菌脂肪酶基因(LipA)在枯草芽孢杆菌+pab02中的整合表达.pdfVIP

湖南农业大学学报(自然科学版) 2017, 43(2):200–205. DOI:10.13331/ki.jhau.2017.02.016 Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences) 投稿网址： 铜绿假单胞菌脂肪酶基因(LipA)在枯草芽孢杆菌 pab02 中的整合表达 张飞燕 1，何敏 1,2，王振华 3，潘康成 1*，冯杰 1，唐慧琴 1 (1.四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心，四川 成都 611130 ；2.德阳市畜牧食品局，四川 德阳 618000 ； 3.成都农业科技职业学院，四川 成都 611100) 摘 要：对铜绿假单胞菌脂肪酶基因(LipA)进行克隆，构建整合表达质粒 pHSG398–16S–lipA，并在枯草芽孢杆 菌 pab02 中整合表达。根据铜绿假单胞菌 LipA 基因设计引物，扩增 LipA 基因，并进行测序，构建整合表达质粒 pHSG398–16S–lipA，转化枯草芽孢杆菌 pab02，并对转化后的阳性菌株进行诱导表达。结果显示，成功从铜绿假 单胞菌 A05 菌株中扩增到长 1 092 bp 的 LipA 基因，该基因与铜绿假单胞菌 LipA 基因(登录号为 AB290342)的同 源性高达 98% ；该基因共编码 311 个氨基酸(aa)，包含 26 个 aa 组成的信号肽和 285 个 aa 组成的成熟肽；成功构 建了整合表达质粒 pHSG398–16S–lipA，并将 LipA 整合到枯草芽孢杆菌 pab02 染色体上，获得了重组枯草芽孢杆 菌 pab02–lipA ；SDS–PAGE 分析结果表明，脂肪酶蛋白得到了有效表达，该蛋白的相对分子质量约为 37 000。 关 键 词：铜绿假单胞菌；枯草芽孢杆菌；脂肪酶基因 中图分类号：Q939.11 文献标志码：A 文章编号：1007− 1032(2017)02−0200−06 Clone and integrative expression of gene lipase LipA from Pseudomonas aeruginosa in Bacillus subtilis 1 1,2 3 1* 1 1 ZHANG Feiyan , HE Min , WANG Zhenhua , PAN Kangcheng , FENG Jie , TANG Huiqin (1.Animal Microecology Institute, College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130， China; 2. Deyang Animal Husbandry and Food Bureau, Deyang, Sichuan 618000, China; 3.Chengdu Agricultural Science and Technology Career Academy, Chengdu 611100,China) Abstract: This experiment aimed to construct an integrative expression vector pHSG398–16S–lipA, and expressed gene Pseu