黄河裸裂尻鱼MSTN基因RNA干扰研究.pdfVIP

2016年 8月 中国实验动物学报 August2016 第 24卷 第4期 ACTA LABORATORIUM ANIMALISSCIENTIA SINICA Vol_24 No．4 蠕研究报告 ； ； 黄河裸裂尻鱼MSTN基因RNA干扰研究 孔庆辉 ，晁燕 ，夏明哲 ，祁得林 (1．青海大学 农牧学院动物科学系，西宁 810016；2．青海大学 生态环境工程学院，西宁 810016) 【摘要】 目的 利用反义寡合甘酸技术抑制肌肉生长抑制素 (myostatin，MSTN)的表达，评估MSTN基因的 沉默效果 ，并检测 RNA干扰后对下游基因的影响。方法 通过构建黄河裸裂尻鱼 (Schizopygopsispylzovi)MSTN基 因RNA干扰 (RNAi)重组腺病毒载体 1P3(DSPMSTN273+250+1737)和1P2(DSPMSTN195+1670)，并将其注射 黄河裸裂尻鱼肌肉组织，进行活体 RNA干扰；利用real—timePCR和Westernblotting评估MSTN基因的沉默效果 ，并 检测 MSTN基 因RNA干扰后肌肉肌酸激酶 (muscle—typecreatinekinase，M—CK)基因转录水平的调控作用。结果 real—timePCR分析结果表明，与 HK组 (病毒通用阴性对照组)和 N组 (空 白对照组)相 比，重组腺病毒载体 1P3对 黄河裸裂尻鱼肌肉MSTN基因的转录具有明显的干扰作用(P0．05)，抑制率达53．5％；而重组腺病毒载体 1P2对 MSTN基 因的转录无明显干扰作用 (P0．05)。Western—blotting分析结果与 real—timePCR结果相一致 。同时，经 1P3干扰后随着MSTN基因转录水平的下降，其肌肉肌酸激酶M—CK基因表达水平显著上升。结论 通过 RNAi 技术能够有效的抑制 MSTN基因的表达 ，并能够上调 M—CK基 因的表达量 。因此 ，证 明了在黄河裸裂尻鱼 中MSTN 能够抑制M—CK的转录 。揭示高原土著鱼类 MSTN基 因的对肌肉的生长发育起到调控作用。 【关键词】 黄河裸裂尻鱼；RNA干扰 ；肌肉生长抑制；肌酸激酶；表达 【中图分类号】Q95—33 【文献标识码】A 【文章编号2016)04—0344—07 Doi：10．3969／j．issn．1005—4847．2016．04．003 InhibitoryeffectofRNA interferenceofM STN gene expression on thedownstream genesin Schizopygopsispylzovi KONGQing—hui，CHAOyan ，XIAMing—zhe，QIDe一1in (1．AnimalScienceDepartmentofAgricultureandAnimalHusbandryCollege，QinghaiUniversity，Xining810016，China； 2．CollegeofEco—EnvironmentalEngineering，QinghaiUniversity，Xining810016) 【Abstract】 0bjective ToinvestigatethesilencingeffectofRN