黄芪甲苷通过SIRT1PGC-1α通路促进退变的髓核细胞增殖.pdfVIP

第37卷第5期 西 安 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) V01．37No．5 2016年 9月 JournalofXi’anJiaotongUniversity (M edicalSciences) Sep．2016 ◇ 中医药研究◇ 黄芪甲苷通过 SIRT1／PGC—la通路 促进退变的髓核细胞增殖 冯仲锴 ，孙永强 ，刘汝银 ，岳 宗进 ，王新立 (河南 中医药大学第二附属医院骨科脊柱病 区，河南郑州 450002) 摘要 ：目的 探究黄芪甲苷对退变髓核细胞功能的影响及其作用机制 。方法 原代培养正常与退变髓核细胞并观 察，免疫组化检测细胞中胶原蛋 白Ⅱ(collagenII)的表达；分别采用 2O、4O、6O、80g／mL的黄芪 甲苷处理细胞，通过 CCK一8和 MTT试剂盒检测细胞活力和增殖 ，流式细胞术检测细胞凋亡情况 ；Westernblotting检测凋亡相关基 因 Bcl一2、Bax和沉默信息调节因子 2同源蛋 白1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体 7辅助激活因子 1(PGC一1a)的 表达及其乙酰化和磷酸化水平 ；比色法检测丙二醛 (MDA)、超氧化物岐化酶 (SOD)、B—galactosidase和三磷酸腺苷 (ATP)的含量 。结果 与正常髓核细胞相 比，退变髓核组织 中坏死细胞更多，且 collagen Ⅱ表达降低 ；细胞经不 同浓 度黄芪甲苷处理后 ，40~／g／mL黄芪 甲苷不仅能显著提高退变髓核细胞活力 ，促进细胞增殖并抑制其凋亡 ，而且能上调 细胞 中SIRT1、PGC—la的蛋 白表达和 PGC一1a磷酸化水平 ，下调 PGC—la乙酰化水平 ，增加 SOD和 ATP含量，降低 MDA和 1]-galactosidase含量。结论 黄芪 甲苷可能通过激活 SIRT1／PGC—la信号通路促进髓核细胞 的增殖和存活 。 关键词：黄芪 甲苷；腰椎间盘突出症；髓核细胞；增殖；凋亡；1I型胶原；沉默信息调节因子 2同源蛋 白1；过氧化物酶体 增殖物激活受体 7辅助激活因子一1a 中图分类号 ：R318；R285．5 文献标志码 ：A D0I：1O．7652／jdyxb201605026 AstragalOsideprom otestheproliferation ofdegenerativenucleus pulposuscellsthroughactivatingSIRT1／PGC-lapathway FENGZhong—kai，SUN Yong—qiang，LIU Ru—yin，YUEZong—jin，WANG Xin—li (DepartmentofOrthopedics，RachiopathyW ard，theSecondAffiliatedHospitalof HenanUniversityofTraditionalChineseMedicine，Zhengzhou450002，China) ABSTRACT：Objective Toexploretheeffectsandmechanismsofastragalosideondegenerativenucleus pulposusceils．Methods Normalanddegenerativenucleuspulposuscellswereculturedandobserved，collagen I1 wasdetectedbyimmunohistochemicalstaining．Degenerativenucleuspulposuscellswereculturedwith astragaloside attheconcentrationsof20，40，60and80t~g／mL，respectively．T