- 1、本文档共13页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
细胞骨架的免疫荧光标记及定位观察
免疫荧光技术
免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)又称荧光抗体技术,是标记免疫
技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来
的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗
原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。Coons等于1941年首次采用荧光素进
行标记并获得成功。
根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗体标记上荧光素,制成荧光抗体,再
用这种荧光抗体作为探针检测组织或细胞内的相应抗原。荧光素在一定条件下可与
抗体分子结合同时不影响抗体免疫活性的特性。用荧光抗体浸染可能含抗原的细胞
或组织切片,如有相应抗原存在,则抗原与标记抗体特异性结合,形成的免疫复合
物固定于细胞上,不易洗脱,在荧光显微镜下可以观察到发出荧光的可见物体,从
而可以对抗原或抗体的性质进行定性、定量和定位分析。常用的荧光素有异硫氰酸
荧光素(FITC)和罗丹明(Rhodamine)等。
免疫荧光的应用范围极其广泛,可以用于内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、
神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物、血药浓度等各种生物活
性物质的研究。
免疫荧光技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是:存
在非特异性染色,结果判定的客观性不足,步骤比较复杂。
免疫荧光技术
免疫荧光分为直接法、间接法和补体结合法。
直接法:将荧光素直接偶联在一抗上,不需要二抗。
1.检查抗原法:这是最早的方法,用已知特异性抗体与荧光素结合,制成
荧光特异性抗体,直接与细胞或组织中相应抗原结合,在荧光显微镜下即
可见抗原存在部位呈现特异性荧光。此法很特异和简便,但一种荧光抗体
只能检查一种抗原,敏感性较差。
2.检查抗体法:将抗原标记上荧光素,即为荧光抗原,用此荧光抗原与细
胞或组织内相应抗体反应,而将抗体定位检测出来。
免疫荧光技术
间接法:先用未标记的特异抗体(一抗)与抗原结合,再用有荧光素标记的抗抗体
(二抗,如抗IgG 的抗体)与标本反应,样品中若有与一抗结合的抗原存在,则会
形成抗原-抗体-抗抗体复合物从而达到染色的目的。
1.检查抗体法:此法是先用特异性抗原与细胞或组织内抗体反应,再用此抗原的特
异性荧光抗体与结合在细胞内抗体上的抗原相结合,因为抗原夹在细胞抗体与荧光
抗体之间,故称夹心法。
2.检查抗体法:在样品中加上待检血清,如果血清含有样品中某种抗原的抗体,抗
体便沉淀结合在抗原上,再用间接荧光抗体(如抗种属特异性的IgG 荧光抗体)与
结合在抗原上的抗体反应,在荧光显微镜下可见抗原抗体反应部位呈现明亮的特异
性荧光。此法是检验血清中自身抗体和多种病原体抗体的重要手段。
3.检查抗原法:先用特异性抗体(一抗)与样品反应,再用PBS 洗去未与抗原结合
的抗体,再用间接荧光抗体(二抗)与结合在抗原上的抗体(二抗的抗原)结合,
形成抗原-抗体- 荧光抗体的复合物。由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体显著
多于直接法,从而提高了灵敏度。这是现在最广泛应用的技术。
免疫荧光技术
补体结合法:又称抗补体染色法,是间接染色法的一种改良,基于补体结
合反应的原理,通过荧光标记抗补体的抗体,用于鉴定未知抗原或未知抗
体(待检测的血清)。
1. 直接检查组织内免疫复合物法:用抗补体的荧光抗体直接作用于组织
切片,荧光抗体可以和结合在抗原抗体复合物上的补体反应,形成抗
原抗体补体复合物-抗补体荧光抗体复合物,在荧光显微镜下呈现阳
性荧光的部位就是免疫复合物的存在处,此法常用于肾穿刺组织活检
诊断等。
2. 间接检查组织内抗原法:常将新鲜补体与一抗混合后同时加在组织切
片上37℃孵育,如发生抗原补体抗体反应,补体就结合在此复合物上,
再用抗补体荧光抗体与结合的补体反应,形成抗原-抗体-抗补体荧
光抗体的复合物,此法优点是只需一种荧光抗体可适用于各种不同种
属来源的一抗的标记显示。
免疫荧光中的抗原和抗体
高特异性的抗体是免疫荧光实验的关键,但是很多的实际研究没有商品化的抗
体,就需要制备免疫血清和纯化免疫球蛋白,需要注意的是:
1. 在抗体制备过程中,用于免疫的抗原必
您可能关注的文档
- B细胞免疫球蛋白及T细胞抗原受体基因的B细胞免疫球蛋白及T细胞抗原受体基因的种系结构及其体细胞.pdf
- 第二篇_生物活性成分蛋白质.ppt
- 股票操作很简单(副本).doc
- 羊水过多会对胎儿有什么影响资料.doc
- 临床的执业医师考试培训题第2套b.pdf
- 型肝炎病毒核心抗体诊断试剂盒(酶联免疫)产品介绍资料.pdf
- 水果中维生素C含量测定教学.ppt
- 第一章 下丘脑损害综合征.pdf
- 常染色体显性遗传非综合征性耳聋致病基因定位研究幻灯片.pdf
- 爱爱医资源-13张博士点题班全部课程笔记.pdf
- 第12课 大一统王朝的巩固 课件(20张ppt).pptx
- 第17课 君主立宪制的英国 课件.pptx
- 第6课 戊戌变法 课件(22张ppt).pptx
- 第三章 物态变化 第2节_熔化和凝固_课件 (共46张ppt) 人教版(2024) 八年级上册.pptx
- 第三章 物态变化 第5节_跨学科实践:探索厨房中的物态变化问题_课件 (共28张ppt) 人教版(2024) 八年级上册.pptx
- 2025年山东省中考英语一轮复习外研版九年级上册.教材核心考点精讲精练(61页,含答案).docx
- 2025年山东省中考英语一轮复习(鲁教版)教材核心讲练六年级上册(24页,含答案).docx
- 第12课近代战争与西方文化的扩张 课件(共48张ppt)1.pptx
- 第11课 西汉建立和“文景之治” 课件(共17张ppt)1.pptx
- 唱歌 跳绳课件(共15张ppt内嵌音频)人音版(简谱)(2024)音乐一年级上册第三单元 快乐的一天1.pptx
文档评论(0)