实验二溶血空斑meng教学.pptVIP

实验二 血清分离（眼球取血） 脾细胞制备(吹气球法) 溶血空斑试验 血清分离 眼球采血：左手抓住小鼠颈部皮肤，轻压在实验台上，取侧卧位，左手食指尽量将小鼠眼周皮肤往颈后压，使眼球突出。用眼科弯镊迅速夹去眼球，将鼠倒立，用器皿接住流出的血液。采血完毕立即用纱布压迫止血。每次采血量0.6-0.1mL。 【操作方法】 眼球采血将血液保存于1.5mlEp管中， 4 ℃静置24H 10000rpm/10min，收集血清； -20℃保存待抗体水平检测。同时采集正常小鼠血清作为对照。 小鼠B细胞溶血空斑形成试验 溶血空斑形成试验是基于抗原抗体反应可活化补体，溶解细胞的原理来检测抗体形成细胞的一种体外试验方法，经典的试验是用于检查动物的抗体产生功能。 将绵羊红细胞（SRBC）免疫过的小鼠脾细胞制成细胞悬液，与一定量的绵羊红细胞混合，在补体参与下，使抗体产生细胞周围的SRBC溶解，形成一个肉眼可见的溶血空斑。主要用于测定B细胞抗体产生能力。 【试剂与器材】 1. 健康小鼠（约18～20 克重）。 2. 绵羊红细胞悬液（2.5%）。 3. 指示细胞悬液： 含10% 绵羊红细胞悬液 0.5ml，补体（即新鲜豚鼠血清）0.3ml， Hank′s 液2.0ml。 4. Hank′s 液（pH7.2）。 5. 动物解剖器械、注射器（5ml）、平皿、中 试管、小试管、乳头吸管、载物玻片、