原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
SDS-PAGE 操作标准
SDS操作标准
一、电泳相关溶液的配制：
1、30%丙稀酰胺混合溶液（100ml）：
丙稀酰胺 29g （实际可以为29.2g ）
双丙稀酰胺 1g （实际可以为0.8g ）
用水溶解定容到 100ml，过滤，4 摄氏度保存一个月。
2 、5 ×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：
5 × 1×
Tris base 15. 1g 25mmol/L
甘氨酸 94g 250mmol/L （pH8.3 ）
10%SDS （m/V ） 50mL 0.1% （m/V ）
dH2O 定容至 1000ml。
3、2×SDS 凝胶加样缓冲液：
1.0 mol/L pH6.8 Tris-Cl 10 mL
1.0 mol/L 二硫苏糖醇(DTT) 20 mL
SDS 4g
溴酚蓝 0.2g
甘油 20mL
加水定容至 100mL，于4 ℃保存。
注：1.0 mol/L DTT 可替换为 10% β-巯基乙醇
4 、染色液的配制（1000ml）:
甲醇或者乙醇 500ml
乙酸 100ml
考马斯亮蓝 R250 2.5g ，
去离子水补至 1000ml。
充分混匀后进行过滤，收集滤液备用。当过滤速度变慢时要更换滤
纸，快速过滤完，不可隔夜以免影响染色效果。
5、脱色液（1000ml）:
甲醇或者乙醇 250ml
乙酸 80ml
去离子水补至 1000ml,混匀，备用。
二、SDS分析：
1、20uL收集液，加入5×样品缓冲液5ul，在80℃水浴锅中煮5min。
表一：SDS 聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围：
丙烯酰胺浓度/% 线性分离范围/kDa
15 10-43
12 12-60
10 20-80
7.5 36-94
5.0 57-212
注：丙烯酰胺:双丙烯酰胺的分子比=1:29
表二、5%浓缩胶配方（积层胶、压缩胶）
配制不同体积凝胶所需要各成份的体积/
文档评论（0）