神经妥乐平对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用.pdf

国际医药卫生导报2017年 第23卷第 6期 IMHGN，March2017，Vo1．23 No．6 · 科研课题 · 神经妥乐平对H2O2致PC12细胞损伤的 保护作用 方文丽 范胜诺 廖旺 郑雨秋 廖劭伟 刘军 510120 广州I，中山大学孙逸仙纪念医院神经科 通信作者：刘军，E—mail：docliujun@hotmail．COl-n DOI： 10．3760／cma．issn．1007-1245．2017．06．001 【摘要 】 目的 探索神经妥乐平对 0诱导的Pc12细胞氧化应激损伤的影响及其潜在机制。方 法 用 CCK一8法检测细胞存活率，以流式细胞术检测细胞氧化损伤的发生、细胞内活性氧的生成及线粒 体膜电位的变化 ，荧光显微镜观察细胞内活性氧的产生 ，qR3PCR测定Caspase一3、Bax和Bcl一2mRNA 的表达。结果 Pcl2细胞存活率随H0浓度的增加而逐渐下降。其中，450 MH：O2处理细胞 24h后细 胞存活率、凋亡率 、坏死率明显降低；细胞内活性氧水平表达明显升高；线粒体膜电位JC～1红 ／绿荧光 比值下降；Bax和Caspase一3的mRNA表达升高，而Bcl一2的mRNA表达下降，以上指标与对照组相比， 差异有统计学意义 0．o5)。而预先给予0．)【lUNm／l的NTP处理细胞 12h可明显提高细胞存活率，降 低细胞凋亡率和坏死率，减少细胞内活性氧生成并提高线粒体膜电位 ，抑制 Bax和 Caspase一3的mRNA表 达，促进 Bcl一2mRNA的表达 ，以上指标与HO组相比，差异有统计学意义 0．05)。结论 NTP能抑 制 O诱导的Pcl2细胞损伤，其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平、维持线粒体膜电 位的高能状态和抑制促凋亡基因表达、促进抗凋亡基因表达有关。 【关键词 】 神经妥乐平；PC12细胞；氧化应激损伤；线粒体膜电位；凋亡 基金项 目：2013年国家 自然科学基金 ；广东省 自然科学基金项 目(2014A0303130161 Neur0protectiVeeffectofNeurotropinonH20z-inducedinjuryinpheochromocytomacellsFangWenli,Fan Shengnuo，LiaoWang,ZhengYuqiu，LiaoShaowei,LiuJun DepartmentofNeurology,SunYat--senMemorialHospitalSunYat-·senUniversity,Guangzhou510120,China Correspondingauthor．LiuJun,E-mail：docliujun@hotmail．eom 【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofNeurotropinonH2O2-inducedoxidativestressinjuryin pheochromocytoma(PC12)cellsanditspotentialmechanism．MethodsTheCCK一8assaywasappliedtomeasure thecel1viabilitywhiletheflow cytometrywasusedtodetecttheoccurrenceofcellsoxidativeinjury,the1evel ofintracellularreactiveoxygenspecies(ROS)andchangesofmitochondrialmembranepotentia1．TheROSwas observedbyfluorescencemicroscope，andthemRNA expressionsofCaspase一3，Bax，andBcl一2weredetectedby immunofluorescenceandquantitativerealtimepolymerasechainreaction(qRT-PCR)．ResultsAstheincreaseof H2O2concentration，thesurvivalrateofPC12cellswasdecreasedgradually．Thetreatmentwith450pM o