牛奶中蛋白质含量的测定-凯氏定氮法.docVIP

牛奶中蛋白质含量的测定 ---- 凯氏定氮法 一：实验目的：掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理 学会凯氏定氮法的操作技术 二：实验原理：◆蛋白质的含氮量较恒定，一般为 16%，上下略有浮动 ◆N/16%=N*6.25=蛋白质的含量 ◆样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收，再以标准盐酸溶液滴定，测出释放的氨含量，并计算氮素含量，再乘以6.25即为蛋白质的含量。 ◆整个过程分三步：消化、蒸馏和吸收、滴定 1：消化：蛋白质 + H2SO4 → （NH4)2SO4 + SO2↑+ CO2↑+ H2O 瓶颈45度角倾斜 2：蒸馏：消化液 + 氢氧化钠加热蒸馏，放出氨气 2NaOH＋ (NH4)2SO4＝ 2NH3 ↑ ＋ Na2SO4 ＋ 2H2O 3：吸收与滴定（1）用4%硼酸吸收 （2）用盐酸标准溶液滴定 （3）混合指示剂（甲基红—溴甲基酚绿混合指示剂） 指示剂：红色———→绿色 ———→红色 （酸）吸收 （碱） 滴定 （酸） 3NH3 + H3BO3→ (NH4)3BO3 (NH4)3BO3+ 3HCl → 3NH4Cl + H3BO3 三：实验步骤 1、消化：准确量取牛奶0.5mL，移入干燥的凯氏烧瓶中（勿粘附在瓶壁上），加入0.2g硫酸铜、0.3g硫酸钾、10mL浓硫酸，小心摇匀，于通风橱内消化（先小火，待炭化完全后，加大火力至溶液呈蓝绿色），冷却至室温，定容至25mL。 同时消化一份空白试剂为对照。 2、蒸馏、吸收 ◆取40mL硼酸溶液于锥形瓶中，加2d混合指示剂，置于冷凝管下端，为接受瓶。 ◆量取5mL样品消化液由加料口加入反应室，用5mL蒸馏水冲洗加料口，再加入40%NaOH10mL（溶液呈蓝褐色），不要摇动，立即封口。 ◆夹紧缓冲管下口，开始蒸馏，当接收瓶溶液颜色变化时，继续蒸馏3-5min，下降接收瓶，使硼酸液面离开冷凝管口，继续蒸馏1min，用蒸馏水淋洗浸入硼酸的管外壁，移出接收瓶，滴定。 3、滴定 ◆用0.01mol/L的盐酸标准溶液滴定接收瓶内的反应液 ◆同时做空白对照 四：实验结果计算： ×5 W—蛋白质的质量分数，%； c—盐酸标准液的浓度，mol/L； 1—空白滴定消耗标准盐酸液量，mL； V2—样品滴定消耗标准盐酸液量，mL； m—样品体积，mL； 0.014—氮的毫摩尔质量，g/mmol； F—蛋白质系数。