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本章内容 一、发酵工业原料的种类和成分 二、淀粉水解糖的制备 三、发酵培养基灭菌 要求 营养丰富完全,有利于产物合成; 不能大量加入快C、快N源,应和慢C、N源相结合; 在产物分泌期间,pH 稳定; 加入适量合成所需的物质,如前体等,进行定向发酵; 采用中间补料,以提高发酵单位; 原料的考虑——成本问题 2、淀粉的液化及液化终点的控制 糊化:在温水中,当淀粉颗粒无限膨胀形成均一的粘稠液体的现象,称为淀粉的糊化。此时的温度称为糊化温度。 老化:分子间已断裂的氢键、糊化淀粉又重新排列形成新的氢键的过程,也就是复结晶的过程。 ? 喷射液化 该工艺的特点是利用喷射器将蒸汽喷入淀粉乳的薄膜,在短时间内通过喷射器快速升温至145?C完成糊化、液化,使形成的“不溶性淀粉颗粒”在高温下分散,从而使所得的液化液既透明又易于过滤,淀粉的出糖率也高,同时采用了真空闪急冷却,提高了液化液的浓度。 液化程度的控制 I2试 测定DE值 DE值高,糊精太小,不利于糖化酶作用,影响催化效率,终点DE值低。 DE值低,液化不彻底,糖化速度慢,酶用量大,时间长,过滤性能差。 糖化终点: 终点确定:DE值达最高时,加热灭酶 方法:无水乙醇滴入糖化液,无白色沉淀则达到糖化终点 糖化工艺 淀粉水解糖液质量要求 1、色泽:淡黄色透明 2、糖液不含糊精 3、 还原糖含量:18%(酸解法);25-38%(酶解法) 4、 DE值:﹥ 90% (酸解法) ;﹥ 95%(酶解法) 5、 透光率:﹥ 40% (酸解法) ;﹥ 60%(酶解法) 6、pH:4.6-4.8 7、淀粉转化率:﹥ 92% (酸解法,玉米淀粉糖) ; ﹥ 95%(酶解法,玉米淀粉糖); 87% (酸解法,大米糖) 2、灭菌与消毒的区别 灭菌:用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物,包括营养细胞、细菌芽孢和孢子 消毒:用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿内外的病源微生物。 3、灭菌的原理和方法 干热灭菌法 湿热灭菌法 射线灭菌法 化学药品灭菌法 过滤除菌法 火焰灭菌法 (1)干热灭菌 原理:利用高温对微生物有氧化、蛋白质变性和电解质浓缩作用而杀灭微生物。 常用方法:灼烧和电热箱加热,140-180℃ 1-2小时 使用范围:玻璃及金属用具及沙土管灭菌 (2)湿热灭菌 原理:蒸汽冷凝放出大量潜热,具有穿透力,且在高温有水分条件下,蛋白质易变性。 常用方法: 水煮常压灭菌:100℃ 饱和蒸汽灭菌:一般121℃,30分钟 使用范围:培养基和发酵设备灭菌。 (3)?? 辐射灭菌 原理:利用高能量的电磁辐射与菌体核酸的光化学反应造成菌体死亡。 常用:紫外线、X射线和γ射线。 使用范围:用于室内空气及器皿表面灭菌 (4)化学物质灭菌 原理: 药物与微生物细胞中的成分反应,使蛋白质变性、酶失活。 使用范围: 器皿、双手和实验室、无菌室的环境灭菌, 不能用于培养基灭菌 常用的灭菌剂 (5)过滤除菌 原理:利用微生物不能透过滤膜除菌。 方法: 0.01~0.45 ?m孔径滤膜, 使用范围:用于压缩空气、酶溶液及其他不耐热化合物溶液除菌。 2. 微生物热死定律:对数残留定律 在一定温度下,微生物受热致死遵循分子反应速度理论,微生物受热死亡的速率-dN/dt与任何瞬间残留的活菌数N成正比,即 当Nt=0时, t=∞, 既无意义,也不可能。 一般采用Nt=0.001,即1000次灭菌中只有一次失败。 非对数残留定律: 三路进汽:直接蒸汽从通风、取样和出料口进入罐内直接加热,直到所规定的温度,并维持一定的时间。这就是所谓的“三路进气”。 3.8-2.6 0.77 2.9 1.8 枯草芽孢杆菌FS5230 硬脂嗜热芽孢杆菌FS1518 硬脂嗜热芽孢杆菌FS617 产气梭状芽孢杆菌PA3679 ?值 min-1 细菌芽孢名称 121℃某些细菌芽孢的?值 (二)灭菌温度与时间的计算和选择 培养基成分受热破坏是化学分解反应,为一级动力学反应: - dC / d? = ?′C 培养基灭菌过程中,除微生物被杀死外,还伴随着培养基成分被破坏,在加热下氨基酸、维生素等受破坏。 ln(?2 /?1) ln(?2′ /?1′) = E E′ ln?2/?1>ln?2′/?1′ 70.3 87.9 96.7 92.1 283 318 3
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