融合基因antierbB2 scFvFcCD28CD3(ζ)的构建及真核 .docVIP

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2017-05-29 发布于境外
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融合基因的构建及真核表达隋文君苏世振胡望雄李红智布立敬温州医学院浙江省重点医学遗传学实验室温州摘要利用预测该融合蛋白的三级结构利用的方法分别从重组重组和上扩增出段基因片段即片段简称片段简称和信号肽序列简称利用将段序列连接形成融合基因片段经克隆扩增及鉴定后将融合基因片段与逆转录病毒表达载体相连构建重组真核表达载体电转染人淋巴瘤细胞株筛选后用流式细胞术检测融合蛋白稳定表达情况经预测在与基因片段之间不加连接肽的融合蛋白在三级结构上可形成更佳的功能构象经酶切及测序鉴定均证实成功构建重组真核表达载体在与基

融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)的构建及真核表达隋文君, 苏世振, 胡望雄, 李红智*, 布立敬 (温州医学院浙江省重点医学遗传学实验室, 温州325035) 摘要利用SMODEL预测该融合蛋白的三级结构。利用PCR的方法分别从重组pPIC9k、重组pBullet和pSecTag2B上扩增出3段基因片段，即片段anti-erbB2-scFv(简称A)、片段Fc-CD28-CD3(ζ)(简称B)和信号肽序列(简称S)。利用SOE-PCR将3段序列连接形成融合基因片段S-A-B。经TA克隆扩增及鉴定后，将融合基因片段与逆转录病毒表达载体pLNCX相连