Hepa1-6细胞的培养及小鼠皮下移植瘤模型的建立.pdfVIP

第 26卷 第 4期 实验动物科学 Vo1．26 No．4 2009年 8月 L B0RAT0RYANIMALSCIENCE August2009 Hepal一6细胞的培养及小鼠皮下移植瘤模型的建立 张志灯 曹治云 (1．福建出入境检验检疫局技术 中心 ，福州 350003) (2．福建 中医学 院 中西医结合研究院临床研究所 ，福州 350003) 摘要 ：目的 培养小 鼠Hepal一6细胞 ，建立小 鼠皮下肝癌模型，为后续实验奠定基础。方法 Hepa!一6体外培养 ，观 察细胞生长情况 ，按 2×10，鼠(A组)、2×106／鼠(B组)和 4×10／鼠(C组)的细胞量 ，接种于 C57BL／6小 鼠，观察肿 瘤生长情况。结果 细胞生长速度较慢 ，传代第 3d为指数生长期 ；成瘤率分别为 A组 30％，B组为 80％，C组为 100％；A、B组分别在接种肿瘤细胞后 12d和 10d成瘤，而 C组在接种肿瘤细胞后 7d成瘤，成瘤速度明显高于前 两组 ；第 3周和第 4周 C组和B组肿瘤生长体积显著高于A组 (P0．01)，而 C组和B组之间无明显差异。结论 使用 Hepa1．6细胞 以4×10，鼠的细胞用量在 SPF级雌性 C57BL／6j小鼠前肢部皮下成功建立了肝癌移植瘤 ，完成了 小 鼠肝癌动物模型 的建立 。 关键词：I-Iepa1．6；移植瘤 ；模型 中图分类号：Q95．331 文献标识码 ：A 文章编号：1006—6179(2009)04．0001—03 肝癌发病率高，临床预后差 ，严重影响着人类的 养基购 自InvitrogenCorporation公司，胎牛血清 (FBS) 健康 ，肝癌 围手术期治疗 的情况将影响着肝癌复发 购 自德 国Biochrom公司，胰蛋白酶购 自Sigma公司。 率 、复发时间、生存质量 、生存期。因此 ，建立一个类 自制双抗 (含青霉素、链霉素)。细胞培养箱 CB150 似人肝癌的动物模型，对于研究肝癌的围手术期 的 德 国 Binder公司。 治疗机理及临床治疗方法有重要的意义 。小 鼠肝癌 1．2 细胞培养 动物模型是进行肝癌实验研究的重要材料和手段。 取液氮保存之 Hepal一6细胞株，37℃水浴复温 ， 自20世纪初获得小鼠自发性肝癌模型以来 ，人们借 Hepa1．6细胞置含 5％CO ，37℃的培养箱 中培养 ，培 助这种肝癌动物模型对肝癌的研究不断的取得新的 养基为含 10％FBS的DMEM高糖培养基 ，每2d换液 进展 。 一 次 ，显 微 镜 下 观 察 当细 胞 长 满 瓶 底 时，用 本文将源 自C57BL／6i小鼠BW7756肝癌细胞株 0．025mlML胰蛋 白酶消化 ，消化时间以镜下观察为 的Hepa1．6细胞进行培养，并接种于同源 的C57BL／ 准 ，当多数细胞形态变圆时，应即用含 10％胎牛血 6i小 鼠的皮下，成功建立了皮下移植瘤模型，为后续 清的DMEM液终止消化。低速离心后，吹打细胞制成 治疗肝癌药物研究奠定了基础。 细胞悬液 ，按 1：2～1：3传代。待培养细胞总量达到 实验需求、细胞处于对数生长期时进行消化 ，血球计 1 材料和方法 数板进行计数 ，制成相应浓度的细胞悬液。同期观察 细胞形态 ，进行细胞计数 ，并绘制细胞生长曲线。 1．1 实验动物及试剂