毛竹组织培养中成熟种子消毒方法.PDFVIP

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第４期 — １０３— 江　涛，李晨曦，陈　磊，等．毛竹组织培养中成熟种子消毒方法［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（４）：１０３－１０６． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．０４．０３２ 毛竹组织培养中成熟种子消毒方法 １ １ １ １ ２ １ 江　涛 ，李晨曦 ，陈　磊 ，杨兆河 ，苏　军 ，刘伯斌 （１．福建农林大学林学院，福建福州３５０００２；２．福建农林大学基础林学与蛋白组学研究中心，福建福州３５０００２） 　　摘要：成熟毛竹种子污染严重和萌发率低是制约毛竹组织培养发展的关键因素。研究发现氯气消毒优于常规的 次氯酸钠和高锰酸钾消毒法。试验结果表明，氯气消毒毛竹种子未污染率、萌发率分别可达４５．６０％ ±２．０６％、 ３３３０％±５．５１％，极显著高于次氯酸钠和高锰酸钾消毒法；并且进一步优化试验条件，经过 １ｄ浸种，在０．０１ｍｏｌ／Ｌ 氯气浓度下处理７ｈ，毛竹种子的未污染率、萌发率分别可达９６．２３％±０．１９％、７４．００％±１．８９％；且以氯气消毒的种 子能发育成实生苗和进行愈伤组织的诱导。成熟毛竹种子的氯气消毒方法，可为今后更好地利用毛竹种子进行组织 培养研究奠定基础。 　　关键词：氯气；毛竹；组织培养；未污染率；萌发率 　　中图分类号：Ｓ７９５．７０５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）０４－０１０３－０３ 　　中国毛竹（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａｃｖ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ）是一种 竹种子，挑选出饱满且没有霉变的种子作为试验材料。 重要的经济竹种，具有分布广、种植面积大、蓄积量多等特点， １．２　方法 ［１］ 具有重要的生态功能和经济社会价值 。目前，生产上主要 １．２．１　外植体消毒方法　（１）高锰酸钾消毒法。预处理后 采用移母竹的繁殖方式，其生产成本高，繁殖率低，很难满足 毛竹种子浸泡在３％高锰酸钾溶液中消毒２ｈ，用无菌水清洗 造林地需求［２－３］，通过组织培养进行快速繁殖被认为是发展 ５次，每次７ｍｉｎ，用无菌滤纸吸干水分后，接种于ＭＳ培养基 ［４］ 竹类的新途径 ，有利于进一步开展基因工程育种。 中培养观察，１５ｄ后统计未污染率、萌发率。（２）次氯酸钠消 ［５］ 毛竹组织培养一直是毛竹产业发展的瓶颈 。目前，毛 毒法。预处理后的毛竹种子浸泡在３０％次氯酸钠溶液中消 竹组织培养采用的外植体多为种子、鞭笋、冬笋及春笋。以毛 毒４０ｍｉｎ，用无菌水清洗５次，每次７ｍｉｎ，用无菌滤纸吸干水 竹笋为外植体容易消毒灭菌，但是组织培养中褐化现象严重， 分后，接种于ＭＳ培养基中培养观察，１５ｄ后统计未污染率、 ［６－８］ 且取材受季节限制 。已有报道以成熟种子经过愈伤组织 萌发率。（３）氯气消毒法。１００ｍＬ１０％次氯酸钠与５ｍＬ ［９］ ［１５］ 成功诱导出不定芽 ，有研究发现成熟种子可以在液氮中直 ３６％浓盐酸制备氯气 ，将去皮后的毛竹种子置入大培养皿 ［１０］ 接保存 ，从而能使成熟种子长期保存。以成熟毛竹种子为 中，然后在密闭的容器中，０．０１ｍｏｌ／Ｌ的氯气浓度下消毒５ｈ 外植体进行组织培养研究不受季节限制，是优良的组织培养 后，接种于 ＭＳ培养基中培养，１５ｄ后统计未污染率和萌 ［１１］ 材料 。李楠等研究发现，毛竹种子胚乳易受真菌污染，使 发率。 得在无菌操作中污染率较高［１２－