研究生-组织化学概论2.pptx

病理学技术-组织化学;组织切片法;石蜡切片法;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;冰冻切片法;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;大组织石蜡切片法;;;;其它切片法;;;HE染色 ;;;;;;;;;常用的特殊染色;;;;;;;;;;糖类;;;;;;;脂类染色;2.物理性质 脂类的比重小于1，所以比水轻，根据室温及其 熔点呈固态或液态。熔点取决于两个因素：一是脂肪酸的链长（增加而升高）；另外就是脂类的饱和程度（增加而升高）。 3.存在形式 （1）.储存脂质：大量存在于脂肪细胞中，广泛分布于皮下、 大网膜、 肠系膜、 肾和胰等脏器周围以及肌间组织等处。储存脂质具有支持、保护、维持体温等作用，并参与能量代谢，故又称为能量库。 （2）.基本脂质：存在于细胞内，是细胞原生质的组成部分或形成某种特殊的结构，如细胞膜、线粒体、髓鞘。脂质往往和组织的蛋白质结合而形成脂蛋白。;三、脂类的类型 脂类分为油脂、类脂及其衍生物。油脂（单纯脂）就是油和脂肪的统称。 1.中性脂肪（脂肪）：又称甘油三酯，是甘油和脂肪酸所形成的脂。脂肪又分为简单甘油三酯和混合甘油三酯。 2.类脂（复合脂）：磷脂、糖脂、胆固醇及其酯。 3.衍生脂类：上述脂类的水解产物，包括脂肪酸及其衍生物、甘油、鞘氨醇等。;苏丹III染色法;四、染色步骤 1.冰冻切片厚8--18um 2.蒸馏水稍洗 3.Harris苏木素液中染约1min 4.自来水洗后，用0.5%盐酸乙醇分化，再水洗直至细胞核返蓝为止 5.蒸馏水洗后移入70%乙醇内浸洗一下 6.浸入苏丹III染液中约30min或更长时间。若置于56℃温箱中可适当缩短时间 7.在70%乙醇中分化数秒钟 8.将切片浸于蒸馏水里，待组织片上的乙醇洗净，然后用玻璃棒挑捞切片贴在载玻片上 9.待切片在空气中稍晾干或用冷风机吹稍干 10.及时用甘油明胶封片 五、染色结果 脂肪呈红色，胞核呈蓝色 ;油红O染色法;四、染色步骤 1.冰冻切片厚8--18um，后进行水洗 2.置于密封容器盛装的脂肪染色剂内（稀释后的油红染液）10-15min 3.用60%的乙醇分色 4.水洗 5.在Harris或其他苏木素淡染 30s 6.用水或者1%的磷酸氢二钠冲洗至变蓝 7.附贴与载玻片上，稍干 8.用甘油明胶封固 五、染色结果 脂肪呈红色，胞核呈蓝色;;网状纤维染色;2、形成 它的形成主要是在纤维母细胞的粗面内浆网中，合成可溶性胶原。在醛糖、类脂的作用下，形成可溶性胶原，随后它被分泌到细胞外，在基质中（或在细胞的表面）通过原胶原蛋白分子间的交联，聚合成为不溶性的胶原原纤维即网状纤维。;3、特点 网状纤维纤细，直径0.2-1μm,没有弹性，而有韧性，能抵抗胃液的消化和弱酸的腐蚀。它的主要成分也是胶原蛋白，在电镜下也有胶原原纤维特有的周期性横带。因此，网状纤维在分子结构上可能和胶原纤维相似，只不过胶原原纤维补蛋白质和多糖的基质粘聚成束，形成胶原纤维后，从而失去嗜银性。所以胶原纤维银染色呈阴性而网状纤维则呈阳性，网状纤维的原纤维上包有一层糖蛋白，据称这是导致它有嗜银性的原因。 ;4、分布 网状纤维的分布很广泛，常以两种形式存在。一种是以网状结缔组织形式分布，即有网状纤维和网状细胞同时存在。多分布于造血器官和淋巴网状器官,如红骨髓、脾、淋巴结、肝、扁桃体和胸腺,消化管和呼吸道管壁的淋巴组织内,并成为这些器官的网状支架。另一种是以网状纤维单独存在,没有网状细胞伴随,见于上皮的基底膜,还有平滑肌,脂肪细胞,毛细血管和神经纤维都有网状纤维包裹。我们日常所称的网状纤维染色,主要是显示淋巴网状组织的网状纤维,因为这些组织网状纤维的增多或减少,崩解成断裂,都有助于病理组织上的诊断。;; 在这些方法中,他们主要不同点,一是所使用的氧化剂不同,如有些用高锰酸钾氧化,有些用高锰酸钾和硫酸氧化,有些用高碘酸氧化。目的是要增强氧化的效果,使网状纤维的染色加强,背景更为清晰。二是所使用的银氨液不同,如硝酸银氨液,碳酸银氨液,醋酸银氨液以及氢氧化银氨液等。这些都是配位化合物,简称配合物(旧称络合物)。它们都有一共性,即是每种银氨液都处于离子状态,即离解成带有正电荷的Ag(NH3)2+和带有负电荷的N03-、CO3-、CH3C00-、0H-等。一般来说,氧氧化银氨液(又称氢氧化二氨合银液)是银氨液中最易被还原,容易和组织结合的一种,故一般多采用。但该液较不稳定,对光的敏感性强,故配制后容易形成沉淀，不易保存。;;;;;;;;色素;;;;含铁血黄素(hemosiderin);用以显示和证明组织内局部的各种出血性病变： 外伤所致出血 陈旧性病灶 梗死灶的出血带 易出血的血管瘤所致出血;;