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第十三章 设备与管道的清洗和杀菌  染菌的危害： 使生物反应的基质或产物因杂菌的消耗而损失，造成生产能力下降。 杂菌产生代谢产物，使产物的提取更加困难，造成得率降低，产品质量下降。 有些杂菌会分解产物，使生产失败。 杂菌大量繁殖后，会改变反应液的pH值，使反应异常。 如果发生噬菌体污染，生产菌细胞将被裂解，使生产失败。 防止染菌的措施 培养基灭菌 通气发酵中进行空气过滤除菌 采用处于对数生长期，不含杂菌的种子液 注意接种室、设备及管路的灭菌 注意发酵中的无菌操作，例如流加物料、消泡剂的灭菌。 设备与管道的清洗与杀菌的必要性 污染危险降至最小 防止设备或管道污垢的生成 保证一定的卫生要求 需要清洗除去的污脏物的种类随发酵生产及过程产物等不同而改变的： 培养基贮罐很易结垢变脏。 发酵罐也易污染结垢，尤其是培养基在罐中实消时。 用于分离回收产物的设备和管路因营养物质的积聚而导致高污染。 细胞及蛋白质等的残留积聚和结垢，会孕育发酵培养的交叉感染的可能性。 设备外部的清洗：及时清洗除去泄漏的营养物质。 第一节 常用清洗剂、清洗方法及设备 一、生物工业常用清洗剂 清洗剂：能溶解或分解有机物，分散固形物，具有漂洗、多价螯合和杀菌作用。 目前的清洗剂都是由碱或酸、表面活性剂、磷酸盐或螯合剂等复配而成。 烧碱溶液是很好的蛋白质和脂肪洗涤剂。 硅酸钠是良好的水溶液分散剂，对积垢的分散十分有效。 磷酸三钠因为有良好的分散性和乳化性，使用也较普遍。 酸只用于溶解碳酸盐积垢和某些金属盐积垢。 2．消毒杀菌剂 最常用的化学消毒剂是次氯酸钠。近几年，二氧化氯逐渐取代次氯酸钠。 3．特殊清洗试剂 色谱分离柱树脂的处理：易被烧碱等破坏，可使用6M的氯化胍洗脱蛋白质。 二、设备、管路、阀门等的清洗 人工或半机械法清洗 CIP清洗系统（在位清洗），使清洗过程达到自动化或半自动化。 1、管件清洗 清洗过程中液流速度1.5m/s；20min。 清洗剂清洗时温度不能太高，75℃为最高。 发酵反应结束后马上清洗。 设备清洗后干燥备用。 2．罐的洗涤 小型罐：在罐内放入洗涤剂浸泡。 大型罐：灌顶喷洒洗涤。 喷射洗涤设备：球形静止喷洒器和旋转式喷洒器。 3．生物加工下游过程设备的清洗 采用CIP清洗系统（在位清洗），洗涤剂和清水轮换洗涤 采用去离子水 PHLC介质对碱较敏感，不能耐受NaOH等碱性洗涤剂，可用硅酸钠代替。若色谱系统使用的是软性介质，则只能在低压力和流速下进行清洗。某些情况下（如在位冲洗）不能提供充足的清洗度时，应将填充基质卸下来再用洗涤剂浸泡洗涤。 错流的微滤或超滤系统常使用CIP系统清洗。 4．辅助设备的清洗 注意： （1）空气过滤器和液体过滤装置不易清洗干净，必要时需用人工进行清洗。 （2）无论何种热交换设备，若是用于培养基的加热或冷却，换热面上的结垢或焦化是很难避免的，也不易清洗。适当提高介质流速对减少此问题非常有效。 三、CIP清洗系统及设备 所谓CIP系统，是clean in place的简称，意即内部清洗系统。 CIP利用离心泵输送清洁液在物料管道和设备器内进行强制循环，达到清洗目的而不需要对管道设备解体，提高设备利用率减少劳动强度。 CIP清洗系统有多种形式，传统上是一种一次性洗涤系统，即消毒剂只供使用一次即舍去。 一次性使用系统适用于那些贮存寿命短，易变质，不宜重复使用的消毒剂。 它包括一个含有进水孔及水平探针的罐和一台离心泵用以驱动洁净的洗涤剂的循环利用，并设有一喷射口以通入加热蒸汽或添加经计量泵计量的洗涤剂。 若生产设备只用于生产单一产品，洗涤剂可重复利用，不仅节省洗涤剂用量，而且减少排污对环境的污染。 用循环回收水配置初洗涤液，可节省用水。配料罐内有换热蛇管，用以加热洗涤剂，用泵使洗涤剂循环。从贮罐中心取样测量洗涤剂浓度以保证其正常值。需配置中和罐以备加酸中和碱性洗涤剂。 该系统包含洗涤剂及水的回收罐，循环泵，过滤器等。 预洗用水使用回收水，用完后可直接排放或贮留一段时间以进行中间洗涤。 洗涤剂可使用混合洗涤剂，如果需要，也可用化学洗涤剂。要确保洗涤温度在预定的范围内。洗涤剂及漂洗用水循环使用一定次数，当其所含的污脏物达到一定浓度后就不宜回收而需排放废弃。 四、清洁程度的确认 1．清洁程度的检验 清洁程度检验系统和方法包括设备检验、操作检验和成效检验。 2．表面清洁规范 无残留固体污赃物或垢层； 在良好光线下无可见污染物，且在潮湿或干燥的状况下，表面均没有明显的气味； 手摸表面，无明显的粗糙或滑溜感； 把白纸印在表面后检查无不正常颜色； 在排干水后表面无残留水迹； 在波长340～380nm光线检查表面无荧光物质。 蛋白质污脏物的检测 残留细胞的检验 致热物质的检测 检查最终漂洗结果 第二节 设备及管