黑曲霉黄色变株A—2580产耐温酸性蛋白酶发酵条件的优化.pdf

维普资讯 第 18卷 第 4期 福建师范大学学报 (自然科学版) Vo1．18 No．4 2002年 12月 JournalofFujianTeachersUniversity (NaturalScience) Dec．2002 文章编号：1000—5277(2002)04—0073—04 黑曲霉黄色变株A一2580产耐温酸性蛋白酶 发酵条件的优化 蒋咏梅 ，章文贤，谢必峰，施巧琴 (福建师范大学生物工程学院，福建 福州 350007) 摘要：经筛选诱变得到一株产生耐温酸性蛋白酶的黑曲霉黄色变株A一2580，对其发酵条件进行 了优化： 通过单因子试验和正交试验，确定其最适培养基为 (g／L)：麸皮21．6、豆饼粉 48．4、NHC12、KH2PO 0．8， pH4～5，温度 3O℃的条件下进行振荡培养，发酵 72h，酶活可达 6700u／m1． 关键词：黑曲霉；黄色变株；耐温酸性蛋白酶；发酵条件；优化 中图分类号：Q55 文献标识码：A 酸性蛋白酶是酶制剂工业中的重要酶种，用于医药具有消炎止咳、化痰及助消化作用；在制革工 业 中可用于毛皮软化和脱毛处理 ，也可用于羊毛低温染色；在食品工业 中可用于啤酒的澄清口]．此外， 它在饲料工业中也表现出巨大的潜在价值[3]．但 目前大多数酸性蛋 白酶的性质不尽如人意，在一定程 度上限制了其应用范围．本文作者在对产生复合酶的黑曲霉的诱变选育过程中得到一黄色变株，对其 产生的酸性蛋 白酶进行了酶学性质的初步研究，发现该酶为一耐温酸性蛋 白酶．作者对该菌的液体发 酵产酶条件进行了优化． 1 材料和方法 1．1 菌株 黑曲霉 (Aspergillusniger)A一2580，原种由福建师范大学微生物工程研究所提供，经作者多代紫 外线和NTG复合诱变得到． 1．2 培养基 1．2．1 斜面培养基 ：查 氏培养基． 1·2·2 基础发酵培养基 ：黄豆粉 30g，玉米粉20g，KH2PO1g，KNO32g，自来水定容至 1L，pH5．0． 菌种在斜面活化后接入装量为 250ml的三角瓶 30ml，220r／min、28。C培养 72h后测酶活． 1．3 酸性蛋 白酶活力测定 福林一酚试剂法 ：定义在一定条件下酶解酪蛋 白产生 1 g酪氨酸为 1个酶活力单位，以每ml发 酵液所含酶活力单位表示发酵单位，即u／m1． 2 结果与分析 2．1 培养基组分的优化 收稿 日期：2002—04—01 基金项 目：福建省科技厅基金资助项 目 作者简介 ：蒋咏梅 (1971一 )，女，重庆开县人，讲师，硕士 维普资讯 74 福 建 师 范 大 学 学 报 (自然 科 学 版) 2．1．1 碳源对产酶的影响：按表 1分别加入不同种类的碳源代替基础发酵培养基的玉米粉进行产酶试 验 ，培养 72h后测定酶活力．发现碳源为麸皮时产酶最高，说明麸皮 已能提供该菌株产酶所需碳素养 分 ，无需外加其他碳源． 表 1 碳源对产酶的影响 2·1．2 氮源对产酶的影响：将发酵培养基 中的豆粉用其他不同种类的氮源代替进行产酶试验．结果见 表 2，试验表明，在有机氮源中，以牛肉膏和豆饼粉效果较好，考虑其成本，培养基中采用豆饼粉作为 有机氮源 ；无机氮源 中，以氯化铵作氮源时酶活最高． 表 2 氮源对产酶的影响 2·1·3 碳、氮源浓度对产酶的影响：在发酵培养基的基础上，以麸皮为碳源，豆饼粉和氯化铵作为有 机氮源和无机氮源 ，分别试验碳、氮源浓度对产酶的影响，结果见表 3，麸皮作碳源时，浓度 以3 最 好 ；豆饼粉作氮源时，浓度以5 最佳；氯化铵作氮源时，浓度则 以0．6 最有利于产酶．