第3章 代谢控制发酵的基本思想.ppt

第三章 代谢控制发酵的基本思想 授课教师：张 侠 E-mail：zhangxia79@yeah.net 第一节 代谢控制发酵的基本思想 代谢控制发酵能否获得成功，目的产物的产量高低与否，取决于微生物细胞自我调节控制机制是否能够被解除和解除的程度。 最有效的方法就是选育从遗传角度解除了正常代谢控制机制的微生物突变株。 代谢控制发酵的基本思想 切断支路代谢 解除菌体自身的反馈调节 增加前体物的合成 去除终产物 条件突变株的应用 选育不生成副产物的菌株 一、切断支路代谢 1、营养缺陷型突变株（A-）的应用 所谓营养缺陷型就是指原菌株由于发生了基因突变，致使合成途径中某一步骤发生缺陷，从而丧失了合成某种物质的能力，必须在培养中外源补加该营养物质才能生长的突变型菌株。 由于其在合成途径中某一步骤发生缺陷，致使终产物不能积累，因此，也就遗传性地解除了终产物的反馈调节，使得中间产物或另一分支途径的末端产物得以积累。 图 谷氨酸棒杆菌鸟氨酸生物合成途径 ①乙酰谷氨酸合成酶 ②乙酰谷氨酸激酶 ③N-乙酰谷氨酸半醛脱氢酶 ④乙酰鸟氨酸转氨酶 ⑤乙酰鸟氨酸酶 Arg对①→⑤有反馈调节作用。选育瓜氨酸缺陷突变株（Cit-），亚适量添加瓜氨酸，就会积累大量的鸟氨酸 。 ②分支途径 肌苷发酵就是通过代谢流的阻塞来消除终产物的反馈调节，以达到中间产物的积累。 选用腺嘌呤缺陷型Ade-时，切断了IMP到AMP这条支路代谢，通过在培养基中限量控制腺嘌呤的量，可以解除腺嘌呤系化合物对PRPP转酰胺酶的反馈调节，可以IR得以积累。如果在Ade-基础上再诱变成黄嘌呤缺陷型Xan-或鸟嘌呤缺陷型Gua-，可以切断IMP到GMP这条支路代谢，从而增加IR的积累。 ③积累另一分支途径的终产物 在分支合成途径中，由于存在着多个终产物单独存在时不能对其合成途径的关键酶实现全部反馈抑制或阻遏这一现象，因此，可以利用这种机制选育营养缺陷型菌株，造成一个或两个终产物合成缺陷而使另外的终产物得以积累。 例：利用高丝氨酸营养缺陷型(Hom-)或苏氨酸营养缺陷型(Thr-)菌株达到赖氨酸的积累 关键酶天冬氨酸激酶受赖氨酸和苏氨酸的协同反馈抑制 苏氨酸缺陷型 高丝氨酸缺陷型 2、渗漏突变株（AL）的应用 渗漏突变株就是指遗传性障碍不完全的缺陷型。 这种突变是使它的某一种酶的活性下降而不是完全丧失，因此，渗漏缺陷型能够少量地合成某一种代谢最终产物，能在基本培养基上进行少量的生长。 由于渗漏缺陷型不能合成过量的最终产物，即解除了反馈调节，所以不会造成反馈抑制而影响中间代谢产物的积累。 二、解除菌体自身的反馈调节 1、选育抗类似物突变株（Ar） 结构类似物：在微生物生理学中是指某些与指定代谢中间产物、合成途径的终产物等空间结构相似而代谢性能不同的化合物。 判别结构类似物的要点：一是空间结构类似；二是对微生物有致死性或毒性。 结构类似物的作用机理 结构类似物由于与代谢产物结构相似，所以同样能与阻遏物以及变构酶相结合。 可是它们往往不能代替正常的氨基酸而合成蛋白质，也就是说它们在细胞中的浓度不会降低，因此阻遏物与变构酶的结合是不可逆的。 这就使得有关的酶不可逆地停止了合成，或是酶的催化作用不可逆地被抑制。 抗类似物突变株：在含一定浓度结构类似物的培养基中仍能生长的突变株。 选育抗性突变株，因为代谢调节可被遗传性地解除，在发酵时可不再受培养成分的影响，生产较为稳定，不易发生回复突变，因此在发酵生产上被广泛采用。 例：精氨酸的生物合成途径及反馈调节 精氨酸的合成受其本身的反馈抑制和反馈阻遏，为了积累像精氨酸这样非支路代谢途径的终产物，主要采用抗精氨酸类似物突变株。 2、酶特性的利用 在育种过程中，当找不到有效类似物时，如果目的产物的生物合成途径中某个酶具有底物专一性宽的特性，则可利用该酶对其它底物的活性，育得代谢调节突变株。 例：选育精氨酸生产菌 在添加了乙酰赖氨酸和过量精氨酸的培养基中，接种赖氨酸营养缺陷型菌株(Lys-)，从出现的生长菌落中(Lys+)，能够获得精氨酸生物合成酶系的去阻遏突变株。 3、营养缺陷型回复突变株的应用 当一个菌株由于突变而失去某一遗传性状后，经过回复突变可以再回复其原有的遗传性状，即该酶的活性中心结构可以复原，而调节部位的结构常常并没有恢复，这样可以解除或减弱反馈调节。 当难于找到合适类似物或多重抗性交叉难以增加抗性标记，或反馈调节很复杂时，可采用由营养缺陷型选育回复突变株的方法来选育高产菌株。 例，先将金霉素生产菌绿链霉菌（Streptomyces viridifaciens）诱变成蛋氨酸缺陷型，再回复突变成原养型，结果其中有5%的回复突变株的金霉素产量提高了1.2-3.2倍。 原因是在金霉素的合成过程中，由蛋氨酸供应甲基，蛋氨酸在细胞中的浓度