百合枯萎病病原菌分离鉴定与`药剂室内筛选.docVIP

百合枯萎病病原菌分离鉴定及药剂室内筛选 　　摘要：采用组织分离法对枯死的百合（Lilium brownii var. viridulum Baker）鳞茎进行病原分离，根据分离物的培养性状、颜色、孢子大小，结合显微镜检测和分子生物学ITS序列测定，该菌株被鉴定为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）。对菌株进行柯赫氏法则验证，证明尖孢镰刀菌是导致百合枯萎病的病原菌。选择15种杀菌剂对该病原菌进行室内毒力测定。结果表明，广清、绿群、洛菌腈、氟硅唑抑菌效果明显强于其他药剂 关键词：百合（Lilium brownii var. viridulum Baker）；尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）；ITS序列；室内毒力测定 中图分类号：S436.46 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）10-2551-04 DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.10.025 Abstract：The pathogen was obtained from infected bulblets of Lilium brownii and was determined as Fusarium oxysporum according to its culture characters， colors， spore size. Microscope and ITS molecular marker were also used to determine whether F. oxysporum caused blight of L. brownii identified via Koch′s postulation. The indoor toxicity test of 15 fungicides were researched. The results showed that phenazine-1-carboxylic acid，fludioxonil and flusilazole had better inhibitory effect than other fungicides. Key words： Lilium brownii var. viridulum Baker； Fusarium oxysporum； ITS sequence； indoor toxicity 万载有500多年食用百合（Lilium brownii var. viridulum Baker）种植的历史，是中国三大百合基地之一。2006年万载百合种植被列为“国家农业标准化示范区”，龙牙百合被评为“江西省名牌农产品”。但由于栽培品种长期无性繁殖，种性严重退化，枯萎病大面积发生，如何防治百合枯萎病是目前急需解决的问题 引起百合枯萎病的病原菌主要有尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、串珠镰刀菌（F. rnoniliforme）和茄腐皮镰刀菌（F. solani）。邹一平等[1]报道了龙牙百合枯萎病的主要致病菌为尖孢镰刀菌和茄腐皮镰刀菌。李诚等[2]、冯昱人等[3]报道兰州百合枯萎病病原为尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌（F. rnoniliforme）和茄腐皮镰刀菌，主要致病菌是尖孢镰刀菌。杨秀梅等[4]报道了云南百合枯萎病病原为尖孢镰刀菌，并进行了ITS序列分析。在病害防治方面，目前国内报道防治百合枯萎病的杀菌剂主要包括多菌灵、?f霉灵、烯唑醇、中生菌素等，笔者在百合栽培大田试验发现多菌灵、?f霉灵、中生菌素等药剂防治百合枯萎病效果较差，亟须筛选出新型、安全、高效的防治药剂。为了进一步查明万载百合枯萎病病原菌，并筛选出更适宜的杀菌剂，特进行本试验 1 材料与方法 1.1 材料 从江西省万载县白水乡百合基地采集枯萎病龙牙百合鳞球，采用PDA培养分离、提纯病原菌。对15种药剂进行室内抑菌试验，供试药剂见表1 1.2 方法 1.2.1 病原菌的分离和纯化 病原物的分离参照文献[5]和[6]的方法进行。病原物的纯化，主要通过切取菌丝段或挑取单孢进行纯培养，纯化后的菌种转移到PDA斜面培养基上保存 1.2.2 分离病原菌的鉴定 培养性状及形态学观察，根据分离真菌在PDA培养基上的菌丝生长情况和孢子显微形态进行鉴定 病原菌的分子生物学鉴定，采用真菌核糖体基因内转录间隔区（ITS）通用引物ITS1和ITS4扩增病原菌并测序，在NCBI网站，用BLAST软件与GenBank中已知种属的rDNA进行序列比对和同源性分析。病原菌ITS全序列分析委托生工生物工程（上海）股份有限公司进行 1.2.3 柯赫氏法则验证 根据柯赫氏法则，将