[王镜岩生物化学第三版笔记]第十三章 DNA的复制与修复.pdfVIP

第十三章 DNA 的复制和修复 生物体的遗传信息储存在DNA 中，并通过DNA 的复制由亲代传给子代。在子代的生长发育中遗传信息 自DNA 转录给RNA，然后翻译成蛋白质以执行各种生命功能，使后代表现出与亲代相似的遗传性状。 1958 年，F.Crick 提出中心法则： （1）以原DNA 分子为模板，合成出相同DNA 分子的过程。 （2）以某一段DNA 分子为模板，合成出与其序列对应的RNA 分子的过程。 （3）以mRNA 为模板，根据三联密码规则，合成对应蛋白质的过程。 中心法则揭示了生物体内遗传信息的传递方向。 图 DNA 生物合成有两种方式：DNA 复制和反转录 DNA 体内复制涉及：原核、真核生物的染色体、细菌质粒（环状，双链）、真核细胞器DNA （线粒体、 叶绿体）、病毒（双链，环状） DNA 的体外复制：分子克隆。 第一节 DNA的复制 一、 DNA半保留复制 1953 年，Watson 和 Crick 在提出DNA 双螺旋结构模型时就推测DNA 可能按照半保留机制进行自我复 制。 P321 图191 Watson 和Crick 提出的DNA 双螺旋复制模型 在复制过程中，首先亲代双链解开，然后每条链作为模板，在其上合成互补的子代链，结果新形成的两 个子代DNA 与亲代DNA 分子的碱基顺序完全一样，而且每个子代DNA 分子中有一条链完全来自亲代DNA， 另一条是新合成的。 1958 年，Meselson和Stahl用15 N标记E.coli. DNA，证明了DNA的复制是半保留复制。 P322 图19-2 DNA 的半保留复制。 1963 年，Cairns 用放射自显影法，在显微镜下首次观察到完整的正在复制的E. coli. 染色体DNA。 P323 图 19-3 3H-脱氧胸苷标记E.coli. DNA ，经过将近两代时间，用溶菌酶消化细胞壁，将E.coli. DNA转至膜上，干燥，压 3 感光胶片，H放出β粒子，还原银，在光学显微镜下观察。用这种方法证明了大肠杆菌染色体DNA是一个环 状分子，并以半保留的形式进行复制。 DNA 的半保留复制可以说明DNA 在代谢上的稳定性。经过多代复制，DNA 的多核苷酸链仍可以保持 １ 完整，并存在于后代而不被分解掉。 二、 复制起点、单位和方向 DNA 的复制是在起始阶段进行控制的，一旦复制起始，它就会继续下去直到整个复制子完成复制。 1、 复制起点 复制起点是以一条链为模板起始 DNA 合成的一段序列。有时，两条链的复制起点并不总是在同一点上 （如D 环复制）。 在一个完整的细胞周期中，每一个复制起点只使用一次，完成一次复制过程。 多数生物的复制起点，都是DNA 呼吸作用强烈（甲醛变性实验）的区段，即经常开放的区段，富含A.T。 ★环状DNA 复制起点的确定方法 P325 图19-6 ★复制起点的克隆和功能分析——重组质粒转化法 大肠杆菌的复制起点oriC 区1Kb 的重组质粒在转化子中的复制行为与其染色体一样，受到严密控制，每 个细胞只有 1-2 个拷贝，用核酸外切酶缩短oriC 克隆片段的大小，最后得到245bp 的基本功能区，携带它的 质粒依然能够自我复制，拷贝数可以增加到20 以上，这说明发动复制的序列在245bp 的基本功能区，而决定 拷贝数的序列在基本功能区之外和 1Kb 之间。 鼠伤寒沙门氏菌的起点位于一段296bp 的DNA 片段上，与大肠杆菌的复制起始区有86%同源性，而且 有些亲缘关系较远的细菌，其复制起点在大肠杆菌中亦能起作用。因此，复制起始区的结构可能是很保守的。 起始序列含有一系列对称的反向重复和某些短的成簇的保守序列。 2、 复制单位 复制子(Replicon)：Gen