枯草杆菌核糖体基页突变体的译产物分析.PDF

遗传学报，13(4):248-253,.1986 ActaGeneticaSinica 枯草杆菌核糖体基因突变体的翻译产物分析 周 芬 白应林 王苏生 （中国科学院遗传研究所，北京） 运用放射性同位素氨基酸，对枯草杆菌核糖体蛋白质基因突变株作体内蛋白质合成脉冲 标记，随后用等电点聚焦一SDS聚丙烯酚胺双向凝胶电泳以及荧光自显影等技术，分析和比较 了野生型和突变株的翻译产物。发现各菌株的电泳图谱有不同程度的差别，某些蛋白质种类 增加，某些种类减少，另外有某些蛋白质的相对浓度有所增减。同是核糖体蛋白质S4突变株， 在相同时间脉冲标记的电泳图谱也有不同程度的差别。以上结果反映了核糖体蛋白质基因突 变对体内蛋白质合成的影响。 核搪体是细胞内蛋白质生物合成的部位，是遗传信息的翻译场所。由于其生物功能 的重要性和分子结构的复杂性，多年来已进行了较为广泛而深人的研究。这些研究集中 在 ＆cherichiacoli核糖体本身的结构、功能以及遗传学等方面。对Bacillussubtilis核糖体 的研究也开始深入。 尽管能够离体重建核塘体亚基以及分离出多种核糖体蛋白质突变 体，但对每种核糖体蛋白质的功能很少了解，对核糖体基因突变后对翻译产物的影响方面 尚未见报道。 核糖体结构和构型的复杂性意味着核糖休决不是被动地提供蛋白质合成的场所。一 些核糖体蛋白质可直接干预翻译的效率和准确性，而另一些核糖体蛋白质可使核糖体具 有最合理的构型来执行功能。例如遗传分析指出，小亚基蛋白质 S4,S5和 S12是忠实 性蛋白质，这3种蛋白质的基因突变会直接影响对 mRNA 的错译频率。 E.coli的。usE座位，编码小亚基蛋白质S10，参于N蛋白质的抗转录终止作用41〔a 这是由于核糖体降低了翻译 NmRNA的能力，而大亚基蛋白质 L6的突变亦可增加翻 译的准确性51〔。枯草杆菌噬菌体 P(29在各种核糖体蛋白质突变体上的成斑率也有差别。 利用核糖体蛋白质的突变株为材料，深入研究其对翻译产物的影响，将能为我们提供各有 关核糖体蛋白质的功能，以及它们对翻译过程影响的新的知识。 本文通过放射性同位素的脉冲标记、等电点聚焦一SDS聚丙烯酸胺双向凝胶电泳以及 3H标记蛋白质的荧光自显影等方法，分析比较了几株枯草杆菌核糖体蛋白质突变体的翻 译产物，结果报告如下。 材 料 和 方 法 一（）菌株、培养基和生长条件 实验所用枯草杆菌菌株列于表1C以168菌株作 为对照株，所用突变体都来自168菌株系统。 分别从斜面上挑取1环菌，接种于6毫升 LB培养基 蛋（白陈 1外，酵母膏0.5 ， 本文于1985年10月21日收到。 A期 周 芬等：枯草杆菌核糖体基因突变体的翻译产物分析 249 表 I 实验所用 B.subtilis菌株 Table1 IsogenicB.sublihsusedinthiswork 菌株 基因型 来源 Strain Genotype Origin 168 trpC, Y.Takahashi 48L1 trpCZrpsD 64A1 trpC,rpsD 103LI trpCtrpsD 一｛ 98T9 trpCZrplT 见文献 [2] TDL23 trpCZrplW 见文献 L31 NaCI1%0pH7.0)中