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1 线粒体和过氧化物酶体 Chapter 7 2 7.1 线粒体形态 7.2 线粒体结构与化学组成 7.3 导向信号与线粒体蛋白定位 7.4 线粒体功能:氧化磷酸化 7.5 线粒体遗传、增殖和起源 7.6 过氧化物酶体 纲 要 3  线粒体的发现与功能研究 ◆1850年，德国生物学家Rudolph Kölliker第一系统的研究了线粒体。(肌细胞) ◆ 1900年，Leonor Michaelis 氧化还原反应　 ◆ 1943年，Arbert Claude　采用盐法分离技术分离到线粒体　 ◆ 1948年George Hogeboom等采用蔗糖介质分离有活性的线粒体 能量转换的部位 　　　逐步证明了线粒体具有Krebs循环、电子传递、氧化磷酸化的作用，从而证明了线粒体是真核生物进行能量转换的主要部位。 7.1 线粒体的形态结构 4 线状 颗粒状 光镜下形态 大小 直径约0.5~1μm 长度在1.5~3 μ m 故名线粒体 7.1 线粒体的形态结构 5 7.1 线粒体的形态结构 6 7.2 线粒体结构与化学组成 7 将线粒体放在100 mM蔗糖溶液中，蔗糖穿过外膜进入线粒体的膜间间隙；然后将线粒体取出测定线粒体内部蔗糖的平均浓度，结果只有50 mM， 比环境中蔗糖的浓度低。据此推测:线粒体外膜对蔗糖是通透的，而内膜对蔗糖是不通透的 线粒体膜通透性实验 8  首先将线粒体置于低渗溶液中使外膜破裂，此时线粒体内膜和基质(线粒体质)仍结合在一起，通过离心可将线粒体质分离。用去垢剂Lubrol处理线粒体质，破坏线粒体内膜，释放线粒体基质，破裂的内膜重新闭合形成小泡，其表面有F1颗粒。 线粒体组分的分离 9 ◆标志酶:单胺氧化酶; ◆外膜含有较大的通道蛋白:孔蛋白; 外膜(outer menbrane) 革兰氏阴性细菌外膜中的孔蛋白 ß折叠 10 ◆线粒体进行电子传递和氧化磷酸化的部位，通透性差; ◆含有大量的心磷脂(cardiolipin)， 心磷脂与离子的不可渗透性有关; ◆内膜的标志酶:细胞色素氧化酶; ◆按作用分3类酶 ①运输酶类 ②合成酶类 ③电子传递和ATP合成的酶类 内膜(inner membrane) 11 ◆标志酶:腺苷酸激酶 ◆功能:建立电化学梯度 线粒体基质(matrix) ◆标志酶:苹果酸脱氢酶 ◆功能:进行氧化反应， 主要是三羧酸循环 膜间隙(intermenbrane space) 12 线粒体膜的运输系统 13 线粒体的钙调节作用 系统1是由膜动力势引起的Ca2+离子流向线粒体基质; 系统2是通过与Na+离子的交换将Ca2+离子输出到胞质溶胶。 14 ◆线粒体各部分的蛋白质来自何方? ◆定位机理如何? 7.3 前导肽与线粒体蛋白定位 15 蛋白质的两种运输方式 ●翻译后转运 游离核糖体上合成的蛋白质释放到胞质溶胶后被运送到不同的部位， 即先合成，后运输。在合成释放之后需要自己寻找目的地，又称为蛋白质寻靶。 ●共翻译转运 膜结合核糖体上合成的蛋白质通过定位信号，一边翻译，一边进入内质网，在翻译的同时进行转运定位， 通过信号肽，经过连续的膜系统转运分选才能到达最终的目的地，称为蛋白质分选。 7.3.1 蛋白质寻靶与分选 16 细胞质核糖体的蛋白质合成与去向 分秘泡 共翻译转运 翻译后转运 17 游离核糖体合成蛋白质的去向 18 ◆前导肽(leading peptide) 将游离核糖体上合成的蛋白质的N-端信号称为导向信号，或导向序列，由于这一段序列是氨基酸组成的肽，所以又称为转运肽。 ◆信号肽(signal peptide) 　　　将膜结合核糖体上合成的蛋白质的N-端的序列称为信号序列，将组成该序列的肽称为信号肽。 前导肽与信号肽 19 ●长约20-80个氨基酸，通常带正电荷的碱性氨基酸(特别是精氨酸和赖氨酸)含量较为丰富; ●序列中不含有或基本不含有带负电荷的酸性氨基酸，并且有形成两性(既亲水又疏水)α螺旋的倾向。 有利于穿过线粒体的双层膜； ●需要消耗能量; ●需要分子伴侣。 ◆线粒体前导肽的性质 20 ◆前导肽的特异性 　●具有细胞结构的特异性 　●前导肽的不同片段含有不同的信息（双导向序列） 21 两个导向序列，位于N端最前面的为基质导向序列，其后还有第二个导向序列，即膜间隙导向序列，功能是将蛋白质定位于内膜或膜间隙 双导向序列 基质导向序列 膜间隙导向序列 22 ◆如何证明前导肽引导 蛋白质进入线粒体? P274 23 ●分离线粒体 ●与具有线粒体基质定位信号的前体蛋白温育 ●胰蛋白酶处理 ◆实验设计 24 线粒体蛋白定