DNA重组技术的基本工具自制.pptxVIP

专题一　基因工程;基因工程的概念;基因工程的概念;基础理论和技术的发展催生了基因工程;1.1 DAN重组技术的基本工具;;;;;转基因抗虫棉;基因工程培育抗虫棉的简要过程：;此转基因实验实现了哪种生物的哪些性状在另外哪种生物中表达？ 性状的表达与我们从前学过的什么过程有关？ 要实现抗虫基因在棉花中的表达，要提前做哪些关键工作?;基因工程培育抗虫棉的关键步骤：;完成关键步骤需要哪些工具？;1.在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？ 2.现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源DNA的入侵而灭绝，仍能保持一种稳定状态？ 3.怎样才能使外来的DNA失效从而保护自身？;4.从哪里可以找到这种切割外来的DNA而对自身不切割的物质？ 5.科学家是怎样找到这种酶的？ 6.这种酶具有什么作用？;1、来源： 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。 2、种类：4000种;迄今为止，基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的，它们各自可以识别和切断DNA上特定的碱基序列。 细菌中限制酶之所以不切断自身DNA，是因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的DNA可以降解掉。;生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 ;3、作用： 识别特定的核苷酸序列 从特定部位的两个核苷酸之间断开磷酸二酯键 4、结果：形成两种末端;限制酶识别序列的特点： 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 ;当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端。;大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶（EcoRI）能专一识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。;;　　DNA被限制酶切断后有两个反向互补的“黏性末端”。被同一种限制酶切断的几个DNA具有相同的黏性末端，能够通过互补进行配对。;平末端;;;1、种类：两类 E·coli DNA连接酶：连接黏性末端 T4 DNA连接酶：即可连接黏性末端又可连接平末端（连平末端效率较低） 2、作用部位：恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 ; DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。;不是 相同点：都是形成磷酸二酯键;不同点 1、DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键； DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键。;2、DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链； DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。 3、二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。;实战演练;2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA… 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG… 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG… 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…;3、基因进入受体细胞的载体 ———“分子运输车”;基因进入受体细胞的载体;作为载体的必要条件;;载体的种类;基因工程的别名;;基因工程的别名;乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷);;;基因工程中作为载体使用的DNA分子很多都是质粒（plasmid），即独立于细菌拟核处染色体DNA之外的一种可以自我复制、双链闭环的裸露的DNA分子。是否任何质粒都可以作为基因工程载体使用呢？其实不然，作为基因工程使用的载体必需满足以下条件。 （1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 （2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。;（3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 （4） 载体DNA必需是安全的，不会对