03第三讲 分子生物学在药理学中的应用.pptVIP

第三讲 分子生物学方法和体外试验在药理学与毒理学中的应用 单细胞凝胶电泳法（SCGE)荧光原位杂交技术（FISH）单链构象多态性分析（PCR-SSCP)mRNA差异显示技术（DDRT-PCR)抑制消减杂交技术（SSH）基因芯片技术转基因动物 一、单细胞凝胶电泳法 ( SCGE ) 单细胞凝胶电泳（Single-Cell Gel Electrophoresis, SCGE）：又称慧星试验（comet assay），是一项较新的电泳方法。自1978年被Rydcbert等人成功地用于检验单细胞DNA单链断裂以来，经过不断的改进，已成为一种快速、灵敏、简便的检测DNA损伤的方法，广泛地应用于DNA放射损伤、药物的遗传毒性评价、细胞凋亡鉴定等工作中。 1. SCGE的基本原理 DNA超螺旋结构 制片：首先制备细胞悬液，然后制片。常用“三明治”凝 胶：第一层，5％正常熔点琼脂糖，第二层，细胞悬液与0.5％低熔点琼脂糖混合液（10：1）,第三层，0.5％低熔点琼脂糖。 细胞裂解：碱性试验中，pH值为10～12的含去污剂的高盐溶液做溶解液，以裂解细胞。 电泳：电泳前先将玻片浸没于碱性电泳缓冲液中，使DNA解螺旋，然后进行电泳。 中和，染色：用Tris缓冲液中和凝胶后，用染色剂染色。常用染色剂有溴化乙锭、吖啶橙、碘化丙啶（PI）等。 图像分析：在荧光显微镜下观察单细胞电泳图像