无创产前检测.ppt

* 通过测序获得每条染色体真实的核酸片段信息 * 这例是深圳市人民医院的样本， * 另外，还发现了其他常见的染色体的异常，还发现其他，如XX 具体过程，我们将检测异常结果反馈给医院后，医生结合临床经验和B超等信息，决定进行羊水穿刺核型分析，结果验证了我们的检测结果是正确的 * * 无创产前基因检测简介 内容提要 sd_bao@ 常见染色体疾病概述 染色体非整倍体病发病机理 传统产前筛查与诊断技术介绍 无创产前项目、院内流程 四 一 二 三 一，染色体非整倍体概述（唐氏综合征为例 ） sd_bao@ 7世纪 考古学家挖掘出典型唐氏综合征体征颅骨。 素描画中见到具有唐氏综合征样面容的儿童。 John Langdon D own 医生第一次对唐氏综合征的典型体征进行完整的描述并发表。 Down’s syndrome. 法国遗传学家(Jerome LeJeune)发现唐氏综合征是由人体的第21号染色体的三体变异造成的现象。 16世纪 1866年 1959年 21、18、13-三体综合征是人类最常见的三种染色体疾病，患儿面容特殊，绝大多数为严重智力障碍及器官畸形，对家庭和社会造成巨大危害和负担。现代医学对胎儿染色体疾病尚无有效治疗方法，最好的方法是在孕期通过产前筛查及诊断，发现异常并及时采取相应措施 染色体非整倍体疾病临床表现 21－三体照片 a. 同源染色体不分离;b. 姐妹染色单体不分离 二，染色体非整倍体病发病机理 减数分裂中染色体不分离 第一次减数分裂 第二次减数分裂 三，现有的产前筛查与诊断手段 sd_bao@ 产前筛查 母血清学筛查 颈项透明膜厚度筛查 产前诊断 羊水穿刺 绒毛取样 脐静脉穿刺 * 侵入性诊断方式 风险计算 现有产前筛查和产前诊断的缺陷性 来源：Estimated prenatal screening performance 1991-2006 (2006 data are provisional), England and Wales. sd_bao@ 产前筛查（S）100,000 筛查结果阳性（SP）7,000 筛查结果阴性（SN）93,000 唐氏综合征胎儿 400 真阳性 （TSP） 340 假阴性 （FSN） 60 非唐氏综合征胎儿 99,600 假阳性（FSP） 6,660 真阴性 （TSN） 92,940 1992-2006 传统诊断方法（穿刺）导致的正常胎儿流失 5619 最紧迫任务： 新方法的探索： 提高检测的准确性与检出率、降低检测过程 中的假阳性率和假阴性率。 sd_bao@ 四，无创产前基因检测技术产生前提一：孕妇外周血中存在胎儿DNA 胎儿DNA来源和特点 来源： 1 胎儿细胞通过胎盘渗透到母血中，被母体免疫系统破坏，胎儿DNA残留下来； 2 胎儿细胞凋亡； 3 胎盘滋养层细胞的凋亡 基本特点： 1 含量有一定的变化规律。妊娠第4周开始可检出胎儿游离DNA，随着孕周增加而增加，存在个体差异，平均浓度。 2 分娩后短时间内消失，平均半衰期为16.3min (4-30min)， 2h就无法检出。再次妊娠不影响检测结果。 3 DNA片段较小，平均166bp左右。常规技术很难检测 前提二：第二代高通量测序仪发明 6亿个DNA片段/次，全基因组测序只要10天/台； 90个DNA片段/次，全基因组测通要50年/台。 （2012年） 无创产前基因检测：母血浆DNA+高通量测序 * 母体和胎儿ＤＮＡ的混合物 * Unique reads (单一序 列读取）: no mismatch, one location (Lo et al, PNAS, 2008) 理论模型 母亲 Chr 21： 95×2=190 母体外周血中 Chr 21=190+10=200 以21-三体为例：100 DNA单位 /毫升血浆。其中，95个单位来源于母亲， 5个单位来源于胎儿 通过大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数量，经过计数与比较： 正常胎儿 或者 21-三体胎儿 正常胎儿 Chr 21： 5×2=10 母亲 Chr 21： 95×2=190 21-三体胎儿 Chr 21： 5×3=15 母体外周血中 Chr 21=190+15=205 医 院 华大基因 无创产前基因检测流程 sd_bao@ 准确性高于99%； 早期诊断，12孕周即可检测