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仪器分析复习要点 十七章： 高效色谱法（HPLC）在技术上采用了：高压泵、高校固定相和高灵敏度检测器，具有高分离速率、高分离效率等特点。 HPLC与气相色谱法（GC）相比：1、HPLC不受样品挥发性和热稳定性及相对分子质量的限制，只要把样品制成溶液即可，非常适合于分离生物大分子，离子型化合物，不稳定的天然产物以及其他各种高分子化合物；2、液相色谱的流动相不仅起到使样品沿色谱柱移动的作用，这就为控制和改善分离条件提供了一个额外的可变因素，而GC采用的流动相是惰性气体，对组分没有亲和力，仅起运载作用。 HPLC基本上都分为四个部分：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。 梯度洗脱装置：HPLC有等梯度洗脱和梯度洗脱两种洗脱方式，前者保持流动相组成配比不变，后者则在洗脱过程中连续或阶段性地改变流动相组成，以使柱系统具有最好的选择性和最大的峰容量，如同GC中的程序升温。 HPLC的检测系统有：1、紫外吸收检测器：是用于对紫外光（或可见光）有吸收的的样品检测；2、荧光检测器：适用于具有荧光特性的样品；3、电化学检测器：适用于具有电活性的物质。 HPLC的类型按组分在两相间分离机理不同主要分为： 液固吸附色谱法（LSC）：以固体吸附剂为固定相，吸附剂的表面的活性中心具有吸附能力，试样分子被流动相带入柱内时，它将与流动相溶剂分子在吸附剂表面发生竞争性吸附；液固吸附色谱法选择性好，最大允许样品量较大，应用于分离几何异构体、族分离、制备色谱等方面，以及分离偶氮染料、维生素、甾族化合物、多核苷芳烃、脂肪、油类、极性较小的植物色素等。 液液分配色谱法（LLC）：根据物质在两种互不相溶（或部分互溶）的液体中溶解度的不同而实现分离，适合同系物的分离。 化学键和相色谱：适合各种样品的分离测定。化学键和相色谱分为：正相键和相色谱和反相键合相色谱。在反相键合相色谱（固定相是非极性，流动相是极性的）中，极性物质对极性流动相的亲和力较大，顾最先洗脱。正相键和相色谱（以氰基、氨基、二醇基等极性基团键合在硅胶表面为固定相，而已非极性或极性小的溶剂中加入适量极性溶剂为流动相，分离极性化合物）则和反相键合相色谱中的洗脱顺序相反。 离子交换色谱法：它的固定相是离子交换树脂，流动相是水溶液，它利用待测样品中各组分离子与离子交换树脂的亲和力不同而进行分离的，一般可应用于：离子化合物、有机酸和有机碱之类的能电离的化合物、能与离子基团相互作用的化合物（如螯合物或配位体）的分离。 凝胶色谱法：它的固定相为多孔性凝胶类物质，流动相为水溶剂或有机溶剂，它是根据不同组分分子体积的大小进行分离的。它广泛应用来测定高聚物的相对分子质量分布和各种平均相对分子质量，可以分离从小分子至相对分子质量达106以上的高分子，可以很容易地分离低相对分子质量机体中的高相对分子质量的添加剂及反应物，可对未知物进行初步探索分离。 常用溶剂的极性排列如下： 水（极性最大）、甲酰胺、乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、二氧六环、四氢呋喃、丁酮、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚、异丙醚、二氯甲烷、氯仿、溴乙烷、苯、氯丙烷、甲苯、四氯化碳、二硫化碳、环己烷、己烷、庚烷、煤油、（极性最小） ： 气相色谱法（GC）优点：可分析气体、易挥发的液体和固体及包含在固体中的气体，一般要求沸点在500℃以下。缺点：GC要求样品气化，不适用于大部分沸点高和热不稳定的化合物，对于腐蚀性能和反应性能较强的物质，如HF，O3，过氧化氢等更是难于分析。 GC六个基本单元：气路系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统和温控系。 现代GC的气路系统多采用：双柱双气路结构，适用于程序升温，可补偿由于温度变化和固定相流失而产生的噪音，提高仪器的稳定性。 GC的温控系统：色谱柱的恒温箱（分离室）、气化室和检测器都需要加温和控温。 对沸点范围很宽的混合物往往采用程序升温法进行分析。 GC的固定性是由载体和固定液组成。应用最普遍的载体是硅藻土。天然硅藻土是由无 定型二氧化硅及少量金属氧化物杂质组成的单细胞海藻骨架，经过粉碎、高温煅烧，再粉碎过筛而成。因处理方法不同分为：红色载体和白色载体。 根据检测原理不同，GC分为两种类型：浓度型和质量型。 GC检测器可分为四种：1、热导检测器（TCD）——适用于无机物和有机物；2、氢火焰离子化检测器（FID）——适用于含碳氢的化合物，痕量有机物；3、电子捕获检测器（ECD）——适用于具有电负性的物质；4、火焰光度检测器（FPD）——适用于含S、P的化合物。 GC检测器的主要技术指标：灵敏度、检出限、检测器的线性范围。 GC操作条件的选择：载气及其流速的选择（一般采用高于最佳流速的载气流速，以加速分析速度）、柱温的选择（柱温应介于固定液的最低使用温度和最高使用温度之间）。 毛细管柱结构的特殊性使之与