心血管药理学的研究方法.pptVIP

血脂异常是血中总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白—胆固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）超过正常范围及（或）高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）低下。 高脂血症是指TC或（和）LDL-C或（和）TG增高。血脂异常在动脉粥样硬化（AS）的发生发展及其引起的心血管事件（CVE）中起非常重要的作用。 高TC血症，特别是LDL-C增高，是发生CHD的最重要的危险因素。 流行病学资料显示，芬兰TC最高，CHD发病率也最高，日本TC最低，CHD发病率也最低。 Cuff Placement and Administration of anti-c-fms and anti-PDGF-Rb mAb Bone Marrow-derived Endothelium Cells in Cuff-induced Vascular Remodeling Lesion ◎ 行动灵敏，易发生逃逸。 ◎ 性情较其他品系小鼠急，抓持不当易被咬伤。 ◎ 成年雄鼠之间易发生撕咬。 apoE-/-小鼠 ◎ 较好地反映人类胆固醇代谢的调节。如肝脏合成胆固醇的比例，人内源性胆固醇约有90%是肝外组织合成的，雄性金黄地鼠肝外合成比例约为85%，而雌性大鼠只有35%是肝外合成、雌性小鼠只有55%在肝外合成。 ◎ 较低的高脂负荷即可建立理想的动物模型。饲料中胆固醇含为0.2%即可成功造模。大鼠饲料中胆固醇的含量多为1-2%，超过自身合成量的10倍， 且要在饲料中加入胆汁酸盐才有能达到理想的血脂水平。 ◎ 建立高脂血症模型所需时间短。喂饲高脂饲料后3-4周，血TC、TG 可达较为稳定的水平。 金黄地鼠(hamster) 降脂中药的药理学研究(一) ◎ 脂质含量及酶的测定 a. 血脂含量的测定 血清总胆固醇(TC) 血清甘油三酯(TG) 血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) b. 血清酶活性测定 羟甲基戊二酰CoA(HGM-CoA)还原酶 肝脂酶(HL) 脂蛋白脂酶(LPL) 卵磷脂胆固醇酯酰转移酶（LCAT） ◎ 载脂蛋白含量的测定 apoAI apoB apoC ◎ LDLR活性测定 放射性配基法 酶联免疫吸附法 激光共聚焦显微镜测定法 ◎ LDLR基因表达 降脂中药的药理学研究(二) ● 动脉粥样硬化的研究 与动脉粥样硬化形成有关的细胞和分子 Fatty-Streak Formation in Atherosclerosis Endothelial Dysfunction in Atherosclerosis Unstable Fibrous Plaques in Atherosclerosis Formation of an Advanced, Complicated Lesion of Atherosclerosis ApoE Knockout Mice 0 6 12 18 wks of age High Fat 0.3% Cholesterol T-Chol 1500-1800 mg/dl Normal Chow T-Chol 500-700 mg/dl Atherosclerotic Lesion 抗动脉硬化中药的药理学研究(一) ◎ 血脂的测定 ◎ 病理形态学研究 制作主动脉弓病理切片 染色及斑块面积的测定，测定斑块面积用imagepro plus软件 ◎ 分子病理学研究 通过免疫组织化学，用特定的抗体检测斑块组织中相关分子的表达 抗动脉硬化中药的药理学研究(二) ◎ 分子生物学研究 巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)及其受体c-fms的基因表达 血小板来源的生长因子(PDGF)受体的基因表达 凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)的基因表达 趋化因子(cxcl16、MCP-1及其受体CCR2等) ● 血管再狭窄的研究 动物模型 三种小鼠血管再狭窄模型 ◎ 塑料微导管损伤模型（Cuff 植入模型） ◎ 金属丝颈动脉损伤模型 ◎ 金属直弹簧丝股动脉损伤模型 塑料微导管损伤模型 金属丝颈动脉损伤模型 (据Lindner医师等所著论文的图例部分引用） 金属直弹簧丝股动脉损伤模型 （据Sada医师等所著论文引用） C57BL/6 Mice (Recipient) BM cells=5X105