油菜花粉总脂肪酸部位提取与纯化工艺探讨.doc

油菜花粉总脂肪酸部位的提取与纯化工艺研究 　　[摘要]对油菜花粉总脂肪酸部位的提取（CO2超临界萃取）和纯化（醇洗除杂）工艺进行优化。通过星点设计-响应面法，以脂肪油的得率为指标，对油菜花粉总脂肪酸部位的CO2超临界萃取工艺进行了优化；通过正交设计，以总脂肪酸（亚麻酸酰胺、亚麻酸甘油酯、亚麻酸和棕榈酸）含量为指标，对提取物进行醇洗除杂。优化得到超临界萃取工艺为萃取温度60℃，萃取压力35MPa，萃取时间3h，纯化工艺为醇浓度80%，醇倍量为50倍，醇提时间1.5h。油菜花粉总脂肪酸部位经提取纯化，质量分数能达到60%左右，且该工艺稳定可行，适于工业生产 [关键词]超临界萃取；油菜花粉；总脂肪酸；星点设计；响应面法 油菜Brassica campestris L为十字花科芸苔属植物。油菜花粉由蜜蜂采集的油菜花粉加入蜜蜂的唾液和蜂蜜组成。油菜花粉中脂肪类化合物的含量丰富，杨艺婷对20种蜂花粉中脂肪酸的组成进行了分析，其中油菜花粉脂肪酸可达5.30mgg-1，且饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比例合理，具有很高的开发利用价值和可观的经济前景。CO2超临界萃取和醇洗除杂相结合工艺得到的油菜花粉总脂肪酸部位，经药效实验证明，具有良好的抗前列腺增生的作用，现对具体工艺条件进行优化 1 材料 KCC高精度计数天平（上海恒平科学仪器有限公司），JJ-1大功率电动搅拌器（常州国华电器有限公司），索特真空干燥箱（南京索特干燥设备厂），HAl21-50-02型超临界萃取装置（江苏南通华安超临界萃取有限公司），BC-R501旋转蒸发器（上海贝凯生物化工设备有限公司），DZF-6020真空干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂），Mettler AL204电子天平[1/1万，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]，Agilent 1100高效液相色谱仪（配DAD四元泵，Alhech3300蒸发光散射检测器），Millipore纯水仪（Ellr 5，上海密理博贸易有限公司） 油菜花粉（产地：内蒙古集宁；鉴定人：康济大药房中药执业药师吴舟），乙醇（徐州香醅酒业有限公司，食用级），甲醇（南京化学试剂有限公司，批号10112511291），乙腈（TEDIA，批，亚麻酸（百灵威科技有限公司，批号00224ME），亚麻酸甘油酯（百灵威科技有限公司，批号20509），棕榈酸（中国食品药品检定研究院，批号190029201001），亚麻酸酰胺（上海医药工业研究院） 2 方法及结果 2.1 总脂肪酸含量测定方法 2.1.1 色谱条件 色谱柱为YMC J’sphere ODS-H80（4.6mm×250mm，4μm），流动相乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0～10min，40%～60%A；10～20min，60%～80%A；20～30min，80%～100%A；30～35min，100%A），流速1.00mLmin-1，ELSD漂移管温度85℃，气体空气，流速3.0Lmin-1，柱温35℃，进样量20μL 2.1.2 对照品溶液的制备 分别精密称取亚麻酸酰胺对照品0.05634g，亚麻酸甘油酯对照品0.01000g，亚麻酸对照品0.18520g，棕榈酸对照品0.10307g，依次置于25，10，10，25mL量瓶中，加甲醇使溶解，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得2.2536gL-1对照品储备液①，1gL-1对照品储备液⑦，18.52gL-1对照品储备液③，4.1228gL-1对照品储备液④ 分别精密吸取对照品储备液①2mL，②3mL，③1mL，④2mL置于同一10mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液Ⅰ，再精密吸取混合对照品溶液Ⅰ1mL置于2mL量瓶中，再用甲醇定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液Ⅱ。混合对照品溶液Ⅰ中的质量浓度依次为0.4507，0.3000，1.852，0.8246gL-1。混合对照品溶液Ⅱ中的质量浓度依次为0.2254，0.1500，0.9260，0.4123gL-1 2.1.3 供试品溶液的制备 称取一定量的油菜花粉工艺样品，精密称定，置25mL量瓶中，用甲醇超声溶解并定容至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得 2.2 前处理 取油菜花粉适量，加6倍量水常温搅拌4.0h，滤干或离心，除去上清液，沉淀减压干燥，得油菜花粉水洗部位 2.3 超临界萃取工艺优化 将油菜花粉水洗部位粉碎成粗粉，称取一定量，置萃取釜中加热加压循环提取，提取完成后从出料口出料，得提取物，称重，计算得率（按油菜花粉水洗部位计算） 2.3.1 单因素实验设计 考察萃取压力、萃取温度、萃取时间和装料量对得率的影响，以脂肪油得率作为考察指标 2.3.1.1 装料量对