植物组织培养—第一章.pptVIP

（二）培养基按试验目的分为： 诱导培养基，继代培养基，分化培养基，生根培养基。 诱导培养基 （脱分化培养基）： 外植体诱导发生愈伤组织的培养基。 水稻诱导愈伤组织时加2.4-D；而烟草、胡萝卜既需生长素，又需细胞分裂素。 继代培养基： 诱导出愈伤组织后，使愈伤组织能不断地生长下去的培养基。 分化培养： 由愈伤组织诱导形成小苗（幼芽或胚状体）的培养基。 ① 不加任何激素的基本培养基，即可诱导分化。如水稻、珍珠粟、甘蔗等植物。 ② 加较高浓度细胞分裂素和少量生长素培养基。如烟草、矮牵牛、四季海棠、天竺葵、菊花、倒挂金钟等组织的分化。 ③ 只加细胞分裂素的培养基。如豌豆、油菜、小麦等。 生根培养基： 诱导再生小苗生根的培养基。 在无任何生长激素的基本培养基中就可生出良好的根系。如烟草、红薯、草莓、枸杞等。 有些需加入少量的NAA、IAA或IBA以诱导根。 有些需要减低培养基中无机盐的浓度。如用MS 培养基中1/2或1/4的无机盐诱导生根，常可获得良好的效果。 生长素和细胞分裂素对拟南芥愈伤组织器官分化的影响 NAA 0.5mg/L 6-BA 0.5mg/L 生长素和细胞分裂素对褐斑伽蓝叶片器官分化的影响 （三）培养基按其物理性质划分为： 固体培养 在培养基中加入一定量的凝固剂，使液体培养基固化,一般用于组织或器官培养. 优点：使用方便，占地不大。 缺点：培养外植体只能有部分组织与培养基接触，培养物上下部因接受养分不均匀，引起组织生长的差异。 液体培养 培养物消毒后直接置于液体培养基中培养,一般用于细胞培养。 优点：培养物吸收营养比较充分，容易获得均匀一致的细 胞群体。 缺点：转换培养基较麻烦。 液体培养又分为静止培养和振荡培养两种形式。 静止培养 在液体培养中用滤纸做成纸桥，桥系紧贴培养液表面，四周插入溶液中，直至瓶底部，使营养液借助毛细管力渗入滤纸，培养物置于滤纸桥面，通过纸桥源源不断地供给养分。 振荡培养 将装有培养物和液体培养基的器皿置于转床或摇床上进行培养，它既能使培养物在培养过程中均匀的接触吸收培养基成分，又能保持良好的通气条件. 摇床有旋转式、半旋转式和往复式三种。速度比转床快。 （三）培养基的筛选 筛选：在多种培养基上培养，根据培养物的生长情况，确定较适宜的培养基。 调整：根据培养物的生长情况或培养目的的不同，对培养基进行调整，探索新的培养基。 如：改良MS、改良B5培养基、N6培养基等。 三、 培养基的制备 （一）母液的配制 大量元素母液：配制原溶液的10～50X，依次溶解，混合定容。 微量元素母液：一般配制100X，定容。称量时最好用万分之一的电子天平。 铁盐母液：亦配制100X，硫酸亚铁和乙二胺四乙酸钠（Na2-EDTA）分别溶解后，混合后再螯合30分钟，最后定容。 有机物母液：100X，定容。 生长调节物母液：浓度0.5～1mg/ml。 生长素类：IAA、2.4-D、NAA、IBA为有机酸，制备时用碱液溶解。 IAA溶液配置：一般称25mg ，加0.1mol/L NaOH 2～3ml，溶解后，加水定容25ml，即为IAA 1mg/ml，也可用无水乙醇溶解后定容。 细胞分裂素类，KT、BA等，一般用0.1mol/L HCl溶解后加水定容。 配制母液注意几点： 配制倍数不宜过高，可避免浪费；也可避免倍数过高，吸取量相对少而影响准确性。 母液配制好后应放在2～4℃冰箱内保存。 母液贮备时间不宜过长。过长时宜出现沉淀和微生物污染。 几种培养基成分表(mg/L) 培养基 成分 MurashigeSkoog (MS,1962) Gamborg (B5,1968) White (W-63,1963) N6 朱至清，1975） （NH4）SO4 NH4NO3 KNO3 Ca(NO3)2.4H2O CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 NaH2PO4.H2O Na2-EDTA Fe-EDTA NaFe-EDTA FeSO4.7H2O KCl Na2SO4 Fe2SO4)3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI MoO3 Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl.6H2O 盐酸硫胺素VB1 烟酸 盐酸吡哆醇VB6 肌醇 甘氨酸 蔗糖 琼脂 pH ? ? 1650 1900 ? 440 370 170 ? 37.3 ? ? 27.8 ? ? ? 22.3 8.6 6.