滑膜肉瘤动物模型分子细胞遗传学研究Molecular Cytogenetic Studies of Synovial Sarcoma.pdf

遗传 HEREDITAS(Beijing)16(3):12-161994 滑膜肉瘤动物模型的分子细胞遗传学研究 毛 新 华（西医科大学精神科遗传室 成都610041了 阿部周一 野岛孝之 吉田迪弘 川本北海道大学理学部动物染色体研究施设） 摘 要 用 1例日本滑膜肉瘤(SS)患者的瘤组织标本接种裸鼠，获得了肿瘤生长。亲本肿瘤与裸鼠肿瘤 在病理组织形态上存在一定差异，但两者的免疫组织化学特征相同．染色体分析表明，Sq细胞株存在 染色体数目和结构异常，患者外周血淋巴细胞染色体核型为正常女性，46,XX.SS细胞株巴氏小体检 出率低于对照，其正常X染色休比易位X染色体晚复制 17小时．DNA印迹实验表明，SSDNA存在 D2S3座位等位片段丢失，DIS57,D17S5和 D13S30座位基因的部分缺失，但无 DXS7,DXS14和 D2S44座位基因改变． 关键词 滑膜肉瘤，动物模型，分子遗传学，细胞遗传学 MolecularCytogeneticStudiesofSynovialSarcoma Mao Xin (DivisionofMedicalGenetics,DepartmentofPsychiatry,WestChinaUniversityofMedicalSciences,Chengdu610041) SyuitiARE TakayukiNOJINA MichihiroC.YOSHIDA (ChromosomeResearchUnit,FacultyofScience,HokkaidoUniversity,Sapporo,Japan) 滑膜肉瘤是一种罕见的软组织恶性肿瘤，多见于男性青少年．迄今为止，该肿瘤的病因及癌 变机理尚不清楚Cs)。动物模型是研究肿瘤病因及癌变机理的重要材料。已有一些学者建立了SS 裸鼠动物模型’，〔”〕。也有学者发现SS细胞存在恒定的t(X;1$)p(11;qll）染色体异常(9,15) DNA印迹实验是从分子水平上研究染色体遗传物质丢失的基本方法。既然SS染色体存在t(X; 18)(p11;q11)，易位的X染色体是否伴有Xpll断裂点的基因丢失或重排？是否存在其它染色体基 因改变？为了探讨这些间题，作者用1例日本SS患者的瘤组织建立了裸鼠模型，用病理学、免疫 组织化学、染色休分析及DNA印迹实验等方法对该例SS患者和裸鼠模型进行了研究． l材 料 及 方 法 1.1病例及裸鼠模型的建立 患者为60岁女性，肿瘤生长在左股部，病理诊断为单向纤维型SS,剪碎新鲜瘤组织块，用18 号针头的注射器将0,3ml瘤组织悬液注入BALB/CAJC-numice(AihonClea）背部皮下，每周用 游标卡尺测量l次肿瘤生长情况。 3期 毛 新等：滑膜肉瘤动物模型的分子细胞遗传学研究 13 1.2病理学、免疫组化检查 将亲本及裸鼠肿瘤用10％中性福尔马林固定，HE染色，光镜检查．另一部分标本用2％戊二 醛固定，四氧化饿后固定，Epon812包埋，超薄切片，乙酸双氧铀及柠檬酸铅染色，电镜 （日立 H-800）检查．用间接亲和素一生物素一过氧化物酶三步法对石腊包埋标本及培养细胞切片进行免 疫组化检查，使用的单克隆抗体如下：抗S-100蛋白D（ako,稀释1:400),抚神经原特异性烯醇化酶 归ako，稀释 1:200)，抗结合蛋白D（ako，稀释 1:100),抗神经原纤维D（ako，稀释1:100)，抗波蛋白 由ako,稀释1:100)，抗角蛋白D（ako,56及64kd,稀释1:200)，抗上皮膜抗原D（ako，稀释1:200), 1.3细胞株的建立及染色体制备 1.3.1细胞株的建立 将裸鼠间转种至第 3代的瘤组织块剪碎，加人 2ml含 1％胶原酶 I(WorthingtoaBiochemicalCorp）的RPMI-1640培养液于37CI孵育20分钟，将细胞悬液接种于 含 10％胎牛血清F（lowLabs)的RPMI-1640培养液中，在37IC,5%CO：培养