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细胞的形态与记数 湖州师院 杨建民 临时制片方法及细胞形态的观察 (一)人口腔黏膜上皮细胞制片与观察 取一载玻片,夹持载玻片两端,用清洁纱布擦净; 在载玻片中央滴1滴0 .5%次甲基蓝染液; 用消毒牙签的钝端轻轻刮取颊部内侧的口腔黏膜上皮细胞; 将牙签在载玻片的染液中来回滚动数次; 染色2-3分钟,盖上盖玻片,注意不要有气泡产生; 观察。先低倍,再高倍。细胞核被染成深蓝色。 (二)洋葱表皮细胞的制片与观察 取一擦净的载玻片,滴1滴1%碘液; 将洋葱嫩茎用小刀切成小块,取1块肉质鳞叶,用镊子在其内表面轻轻撕下一小块表皮,再用剪刀剪成小块,置于载玻片的染液中铺平; 染色2-3分钟,盖上盖玻片; 先低倍,再高倍。细胞核被染成深黄色。 细 胞 计 数 1.制备血细胞悬液 取1只乙醚麻醉过的蟾蜍,心脏取血1ml,用Ringer液稀释一定倍数制成细胞悬液;同时用蟾蜍血制备血涂片,室温晾干备用; 2 . 熟悉血细胞计数板 血细胞计数板呈长方形,有2个计数室。每个计数室分为9个大正方格,每个大格边长1 mm,计数室的底与盖玻片间的距离为0.1mm,即每大格的容积为1mm×1mm ×0.1mm =0.1mm3 四角的每个大格被分为16个中格;中央的大格被分为25个中格,每个中格被分为16个小格。 3. 滴片 将盖玻片擦净,盖在血球计数板槽上,取制备好的蟾蜍血细胞悬液1滴滴于血球计数板的盖玻片一侧边缘,让细胞悬液自然流入计数室内。注血细胞悬液不可滴得过多,如溢出或盖玻片内有气泡必须重做,否则将影响计数结果。 4. 计 数 在低倍镜下数出计数板上计数室四角大格中的细胞数,如细胞压在格线上时,数上不数下,数左不数右。 5. 细胞浓度计算 将四大格的细胞总数除以4,得出平均每大格的细胞数,每大格的容积为0.1mm3 ,乘以10000即为1000mm3(1ml)。 不同稀释倍数细胞悬液的细胞浓度可用下式计算: 细胞浓度(细胞数/ml)=( 四大格的细胞数/4)×10000 ×稀释倍数 应用显微镜的成像原理,同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺,两尺配合使用,进行测量和运算,得出细胞的大小 测微尺的使用操作 1. 卸下目镜的上透镜,将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上,再旋上目镜的上透镜。2. 将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好,使测微尺刻度位于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。3. 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊,可转动目镜上透镜进行调焦),使两尺左边的“0”点一直线重合,然后由左向右找出两尺另一次重复的直线(图)。4.记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格的长度等于多少μm目镜测微尺每格的长度/ μm=镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数 细胞生物学实验绘图方法与要求 1.在仔细观察的基础上,选择典型结构进行描绘,要求真实、准确(注意各部结构的比例关系)。2.用铅笔绘图,线条要明确清晰,图的深浅明暗一律以点的疏密来表示,点要圆而一致,不得用涂暗影或进行其他美术加工。3.各部结构名称要在一侧引直线注明。各引线要平行不得交叉。4.每幅图的大小、位置在纸面上必须安排得当并注意纸面的清洁。 实验报告 在低倍镜下数出计数板四角四大格中血细胞数,然后取下盖玻片,将血细胞记数板冲洗干净,重新滴片、记数,共三次。取3次记数的平均数代入公式计算出结果。 一、分别求出使用低倍镜(10X),高倍镜(40X)时目镜测微尺每格代表的长度: 低倍镜:目镜测微尺每格代表的长度= XlO(μm)= μm 高倍镜:目镜测微尺每格代表的长度= XlO(μm)= μm 二、分别绘制所观察的高倍镜下人口腔黏膜上皮细胞并注明基本结构。 三、用测微尺测量不同材料各种细胞的大小后,制表格表示测量结果 四、计算蟾蜍红细胞的核质比例。 计算细胞、细胞核体积的公式: 圆 形 V=4/3πr 3(r为半径) 椭圆形 V=4/3πab2(a、b为长、短半径) 核质比 N/D=Vn/(Vc—Vn)(Vn为核的体积,Vc是细胞质的体积) * 目的与要求 1.初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法; 2.熟悉光镜下动、植物细胞的基本形态、结构; 3. 掌握活细胞计数的使用方法。 4.掌握显微测微尺的使用方法。 细胞计数的原理 细胞计数时,先将培养细胞或血细胞稀释成细胞悬液,然后将细胞悬液滴入细胞计数板内,计数计数板上计数室四大格内的细胞数。根据计数室的容积及稀释倍数,即可计算出细胞浓度。 显微测量的原理 物镜测微尺 目镜测微尺 目镜测微尺量测倍率比照表 *
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