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第4章 高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC) 4-1 概述 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析重要手段。 基本理论 在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，采用高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器 1．HPLC法与经典液相色谱法区别 高压：供液和进样压力大，150-350×105Pa 高速：在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流速最高可达 103cm·min-1. 高效：一次分析同时分析多达几十甚至上百个组分 例: 分离苯的羟基化合物，7个组分1min就可完成。 氨基酸分离，用经典色谱法，柱长约170cm，柱径0.9cm，流动相速度为30cm3·h-1，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。 用25cm×0.46cm的Lichrosorb－ODS(5μ)的柱，采用梯度洗脱，可在不到0.5h内分离出尿中104个组分。 2．HPLC法与气相色谱法区别 区别一 气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％(分子量＜200)。 高效液相色谱法