植物种子生活力.ppt

种子生活力的快速测定 种子生活力测定简介 种子发芽率是指在适宜的条件下、在规定的时间内种子发芽的百分数。 它是衡量种子品质的主要依据，在确定播种量及种子生理研究方面具有重要的作用。 用直接发芽的方法测定种子发芽率所需时间长，尤其是对于处于深度休眠状态的种子，几乎难以应用。 而利用快速测定的方法，则能在较短的时间内测得种胚的生活力，以了解种子是否具有发芽的潜力。 学习三种快速测定种子生活力的方法： Ⅰ.氯化三苯基四氮唑（TTC）法 Ⅱ.溴麝香草酚蓝法（BTB法） Ⅲ.红墨水染色法 实验目的 实验原理 Ⅰ.氯化三苯基四氮唑（TTC）法 TTC还原反应 TTC（无色） TPF（红色） 当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱 凡有生命活力的种胚，在呼吸过程中都有氧化还原反应 种胚红色 TTC还原反应 TTC还原反应 种胚染色不明显 由染色程度推知种子的生活力强弱 Ⅱ.溴麝香草酚蓝法（BTB法） 凡活细胞必进行呼吸作用，吸收O2、放出CO2，CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离成H＋和HCO3-，使种胚周围环境的酸度增加，用溴麝香草酚蓝（BTB）可以测定酸度的改变，从而确定种子的生活力。 活种子 BTB呈黄色（6.0≤ pH＜7.1） BTB呈绿色（pH=7.1） BTB呈蓝色（7.1≤ pH＜7.6） 死种子或 生活力较 弱的种子 BTB的变色范围为pH6.0～7.6 Ⅲ.红墨水染色法 凡有生活力的细胞其原生质膜均具有选择性吸收的能力，而死种子胚的细胞原生质膜丧失这种能力，染料可以进入死细胞，胚被红墨水染成红色，而活细胞则否。所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。 材料、设备与试剂 1.材料 玉米种子。 2.设备 恒温箱；电子天平；烧杯；滤纸；漏斗； pH试纸；培养皿（直径9cm）；单面刀片；眼科镊子；白铁皮；棕色试剂瓶。 3.试剂 （1） 0.5%TTC溶液。避光保存，若溶液发红时不能 再用。 （2） 0.1%BTB溶液； （3） 琼脂； （4） 0.1%BTB琼脂凝胶：取0.1%BTB溶液100mL置于烧杯中，加入1.0 g琼脂，用小火加热，并不断搅拌，待琼脂完全溶解后，趁热倒入洁净的培养皿中，使其成为一均匀的薄层（约6~7mm），冷却后备用。 （5） 5%红墨水：红墨水5mL；加自来水95mL。 方法与步骤 1.浸种 将玉米的新种子，用30～35℃温水浸种24h，使其充分吸涨，以增强种胚的呼吸速率。 2.显色（染色）与观察 Ⅰ.氯化三苯基四氮唑（TTC）法 显色 （1）随机取吸涨的种子20粒，用单面刀片沿种胚中心线纵切为二半; （2）将其中的一半置于培养皿中，将另一半在沸水中煮5min杀死种胚，作同样处理（作为对照）; （3）加入适量的0.5%TTC溶液（以覆盖种子为度）; （4）分别做标记; （5）在40℃的恒温箱中放置30min。 观察 倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗1～2次，然后进行观察，区分如下三种情况： （1）活种子：胚全部或大部分被染成红色； （2）死种子：种胚不被染色； （3）不能正常发芽的种子：种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色。 Ⅱ.溴麝香草酚蓝法（BTB法） 显色 （1）取准备好的BTB琼脂凝胶，在培养皿底部用记号笔沿培养皿底部直径划线将BTB琼脂凝胶二等分； （2）将吸涨的玉米种子10粒，种子胚部向下整齐地插入其中一半BTB琼脂凝胶中（种子间距至少1cm）； （3）用沸水杀死种子作同样处理插入另一半BTB琼脂凝胶中（作为对照），分别做好标记。 （4）然后将培养皿置于40℃下保温40min。 观察 在蓝色背景下观察，区分如下两种情况： （1）活种子: 种胚附近呈现深黄色晕圈； （2）死种子或生活力较弱的种子: 种胚附近无深黄色晕圈。 Ⅲ.红墨水染色法 染色 （1） 取已吸涨的玉米种子20粒，沿胚的中线切成 两半； （2）将一半置于培养皿中，加入5%红墨水（以淹 没种子为度），室温下染色0.5min。 （3）染色时间到后，倒去红墨水，用自来水冲洗多 次，至冲洗液无色为止。 （4） 用沸水杀死种子作同样处理（作为对照）。 分别做标记。 观察 区分如下两种情况： （1）活种子: 胚不着色或着色很浅; （2）死种子: 种胚的着色度和胚乳相同。 3.记录及计算 统计上述3种方法胚部有生活力种子的数目，将观察判断结果记入下表（P79 ，表1-2