基于苯并吡喃腈的激活型半胱氨酸荧光探针.pdfVIP

第33卷 第4期 应 用 化 学 Vo1．33Iss．4 2016年4月 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY Apr．2016 基于苯并吡喃腈的激活型半胱氨酸荧光探针 杨婷婷 郭志前 邵安东 赵 平 朱为宏 (华东理工大学精细化工研究所 上海200237) 摘 要 设计并合成了基于苯并吡喃腈为母体单元的近红外激活型荧光探针 (E)．2．(苯并吡喃腈基)乙烯基． 5-(二乙氨基)丙烯酸苯酯 (DCM—AC)，其结构中的丙烯酰酯键作为氨基酸激活反应的响应基团。研究结果表 明，探针分子DCM—AC对半胱氨酸具有高灵敏、选择性光谱响应，不仅能观察到明显的颜色变化，而且探针在 710am处的荧光发射强度显著增强，相应的荧光增强比值与半胱氨酸的浓度 (1．0～8．0p．mol／L)呈现 良好的 线性关系。探针DCM—AC对半胱氨酸的检出限为2．8×10一mol／L，能选择性检测半胱氨酸区别于结构类似的 高半胱氨酸和谷胱甘肽 ，且不受其它氨基酸物质干扰。通过质谱 、核磁和紫外吸收光谱研究了DCM．AC检测 半胱氨酸的反应激活机理：半胱氨酸先通过巯基与DCM—AC上的丙烯酰酯双键发生亲核加成，然后环化脱除 内酰胺环状化合物。 关键词 半胱氨酸 ；荧光探针；苯并吡喃腈 ；选择性 中图分类号：0656．2 文献标识码：A 文章编号 ：1000-0518(2016)04-0397-09 DOI：10．11944／j．issn．1000-0518．2016．40．160053 生物硫醇，如半胱氨酸、高半胱氨酸、谷胱甘肽，在维持细胞的氧化还原进程中起着重要的作用 ¨ ， 水平异常的生物硫醇会导致各种各样的疾病 J。虽然这些生物硫醇具有相似的化学结构，但却表现出 截然不同的生物功能特性 ]。半胱氨酸的缺乏与许多代谢性疾病，如造血功能下降、儿童生长缓慢、脱 发等 J。血浆中高半胱氨酸浓度的增加会损坏内皮细胞和诱导血管损伤 J，而谷胱甘肽的浓度则与艾 滋病、白细胞损失、肝损伤、癌症和神经性疾病等相关 。因此，发展新的检测方法用于鉴别这些重要的 生物硫醇具有重要的意义 。 近年来，检测硫醇的方法得到了快速的发展。其中，反应型荧光探针，因具有高专一性、高灵敏度、 操作简便的特点而被人们持续关注l8J。生物硫醇的巯基具有很强的亲核性，所以检测硫醇的反应型探 针通常都利用了此性质，例如迈克尔加成反应 、与醛基的环化加成反应 。 、磺酰胺或磺酸酯键的 裂解反应 1 以及二硫键断裂反应_l坞等。为了提高反应型探针对结构类似的生物硫醇的选择性，利 用生物硫醇端位的氨基活性，基于串联反应的分子设计策略Et益受到关注 蚴 。另一方面，近红外荧光 探针(发射波长范围650～900nm)对生物体损害小、穿透能力强、背景荧光干扰小，在生物荧光成像方 面独具优势 。目前，文献报道的生物硫醇荧光探针主要有BODIPY[23 、香豆素 ]、荧光素[2 、 罗丹明 。。、菁染料 等类化合物。其中，虽然有报道近红外花菁类荧光探针 。。可以特异性地检测半 胱氨酸，但是由于菁类染料的光稳定性和化学稳定性较差，它们在实际应用中受到了限制。 作为典型激光染料，苯并吡喃腈的衍生物 纠光稳定性较好、量子效率高，特别适合应用于生物样 本检测 。因此，本文利用苯并吡喃腈作为荧光母体，通过在苯并吡喃腈单元上共价连接强给电子基 团4．(二乙氨基)水杨醛，增大共轭体系，使其荧光发射位于近红外区。又利用生物硫醇的巯基具有强的 亲核特性及其端位氨基活性不同，以与4．(二乙氨基)水杨醛连接的丙烯酰氯作为氨基酸激活反应的响 应基团，基于串联反应，设计开发了新型近红外生物硫醇探针(E)-2-(苯并吡喃腈基)乙烯基-5．(二乙氨 基)丙烯酸苯酯(DCM—AC)(Scheme1)。通过质谱、核磁和紫外吸收光谱进一步研究了DCM—AC检测半 2016-02-01收稿，2016-03-02修回，2016-03-02接受 国家自然科学基金项 目资助 通讯联系人：赵平，讲师；Tel：021Fax：021-6425