间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体.pdfVIP

维普资讯 中国兽 医学报 2002年3月 第22卷 第2期 ChinJVetSciMar．2002 Vo1．22No～ 1 间接 ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体 邱德新 ．陈焕春 ，何启盖 ．吴 斌．曹胜波 (华中农业大学畜牧兽医学院．湖北 武汉 430070) 摘 要 ：用特 肾传代细胞 IBRS一8增殖猪伪狂犬茹藉毒 (PRV)鄂 A群 ，藉毒培养上清液 经硅 酸接沉淀、聚 乙二醇 (Mr20000)襄缩后作为包被抗原 。用地化的猪血清 1gG克疫家鬼 ，HRP标记提取 的免抗猪 1gG．制备 出高效价的酶标 抗体 ，酶标抗体工作暾度为 1 5O000；经吝种条件 的选择 ．建立丁捡刹猪伪征犬病血清抗体的间接 EI1SA。所建立的 闻接 ELISA抗原包被浓度为 39．2mg／L，血清最佳稀释度为 l 20，与猪细小藉毒、猪瘟、o型 口蹄症 、猪表原津标准 阳性血清呈 阴性反应，与标准用性血清和 ：临床未感染PRV 的猪血清呈 阴性反应 ；与猪伪狂犬茹持 隹 性血清、免瘟猪 血清和临床发藉猪血清呈 明显的阳性反应 ；与羲 国进 口的PRV抗体检刹 E11sA诊断试剂盒拴删结果比较 ．d5静楮 血清的阴、阳性捡 出井争率均为 100 。丧 明建立的间接 EI1SA具有敏感性高、特异性强、重复性好 的优点 可用于猪 伪征犬病血清抗体的定性和 定量检测。 关t词 ：猪伪狂犬病 ；间接 ELlSA；抗津检测 中围分类号 $854．4 文献标识码：A 文章编号 l005—4545(2002)020149—04 目前，用于猪伪狂犬病诊断的方；击， 床上应用最广泛的 水溶解后定容至1000mI。(5)底物藩液 ：邻苯二胺(OPD)蚰 是血清学诊断技术 ，除血清中和试验(SNT)、琼脂免疫扩散试 mg，溶于 100mL磷酸盐一柠檬酸缓冲液中．加 30 H0：150 验 (AGID)、血凝 (HA)和血凝抑制试验 (HI)外 ．本研究室 已 p．1(现配现用)。(6)终止液 2mo[几 H}^溶液 。 成功地建立 了乳胶凝集试验 (LAT)用于现场检测 PRV抗 1．8 实验动4钉 体重 2～3kg的健康成年家兔，由华中农业 体 在此基础上 ，为能建立一种更敏感、特异 ，且重复性好 ， 大学实验动物场提供 。 便于大规模血清学调查及免疫监测 的血清学方法 ，特进行 了 1．6 PRV抗原的制备 用 DMEM 培养基 (禽 10 犊牛血 本研究。 清)培养 IBRS-2细胞 ，长成单层后倒掉营养液 ，按病毒与培 养基 1 10的比倒接种 PRV鄂 A株病毒 ．37C吸附 1h，加 1 材料与方法 入古 3 犊牛血清的DMEM 维持液 ，置 37C继续培养 当 7 细胞产生病变时收毒， 20C冻融 3攻 ，6000r21]][i14C 1．1 细胞与培养基 1BRS·2细胞，由本室传代保存，用于增 殖病毒；DMEM 培养基 ，购 自G1BCO公司 离 心 30min，去 沉 淀 ，按 每 100mI．上 清 液 加 42．5g (NH )}SO{沉淀病毒，磁力搅拌器搅捧过夜，6000rem~n4C 1．2 病毒与血清 猪伪狂犬病病毒 (PRV)鄂A株 ，本室分 离心30rain．弃上清，沉淀用少量生理盐水溶解 ，装透析袋用 离鉴定保存 PRV鄂A株 阳性血清 ．由本室 自制保存 ；猪伪狂 生理盐水透析除盐 直至检测不