鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病鉴别诊断双重PCR方法的建立....pdfVIP

维普资讯 畜牧兽医学报 2008，39(4)：517—521 ActaVeterinaria etZootechnica Sinica 鸭疫里默氏茵病和大肠杆菌病鉴别诊断 双重 PCR方法的建立和应用 覃宗华 ，蔡建平 ，吕敏娜 ，余劲术 ，吴彩艳 ，温列娜 ，谢明权 (1．广东省农业科学院兽医研究所 ，广州 510640；2．广东省兽医公共卫生实验室，广州 510640) 摘 要 ：本研究从鸭疫里默氏菌提取基 因组 DNA，采用细菌 16SrRNA基因的通用引物，用 PCR方法成功扩增出 鸭疫里默氏菌的部分 16SrRNA基 因，克隆及测序结果表 明其全长 1512bp，G+C含量为 51 ，该序列 已登人 GenBank，登录号为 DQ078779。同时利用生物软件对 GenBank收录的鸭疫里默 氏菌和大肠杆菌的 16SrRNA基 因序列进行分析后 ，设计 了鸭疫里默 氏菌和大肠杆菌的种特异性引物 ，分别能从各 自的 16SrRNA基 因中扩增 出 长度为 342和 718bp的DNA片段。并据此建立 了一种能快速准确鉴别诊断鸭疫里默 氏菌和大肠杆菌病 的双重 PCR方法 ，该方法能从肝脏组织悬液煮沸后 的上清、细菌培养物或提取的细菌基 因组 DNA 中快速扩增 出相应 的 片段 ，进行鉴别诊断 。 关键词 ：鸭疫里默氏菌；大肠杆菌；16SrRNA；鉴别诊断 中图分类号 ：$852．618 文献标识码 ：A 文章编号 ：0366—6964(2008)04-0517-05 EstablishmentandApplicationofDulexPCR AssayforDifferentiatingRiemerella n，lnffpPsff，PrandEscherichiacoliInfectioninDucks QIN Zong—hua～，CAIJian—ping’ ，LU Min-na ，YU Jin—shu ，WU Cai—yan～， W EN Lie—na 。XIE M ing—quan ’ (1．InstituteofVeterinaryMedicine，GuangdongAcademyof AgriculturalSciences，Guangzhou 510640，China； 2．GuangdongKeyLaboratoryofVeterinaryPublicHealth，Guangzhou510640，China) Abstract：Inthisstudy，partialsequenceofRiemerellaanatipestifer16SrRNAgenewasampli— fledbypolymerasechainreaction(PCR)usingthebacteria 16S rRNA geneuniversalprimers， whichits1engthwas1512base—pair (bp)andithasbeen recorded in GenBank andnamedas DQ078779．TheBLAST analysisindicatedthatDQ078779wasthemostsimilaritywithreported 16SrRNA geneofR．anatipestifer．Moreover，species—specificprimersweredesignedaccording toBLASTresultsofdifferent16SrRNA genesequencesofR．anatipestiferandE．coli，which 354and718 bp specificDNA fragmentcould beamplified by thetWO pairsofprimersfrom R．