一步法RT-PCR扩增试剂盒(AMV).PDF

一步法RT-PCR 扩增试剂盒(AMV) 产品编号：B532441 包装规格：10 次/ 100 次 剂盒组成 组分 B532441-0010，10 次 B532441-0100，100 次 10 One Step RT-PCR Buffer 100 µl 1 ml AMV RT 7 µl 50 µl Taq DNA polymerase 7 µl 50 µl RNase inhibitor 7 µl 50 µl h RNase free ddH O 1 ml 2 ml 2 c MgCl (5 mmol/L) 1 ml 2 ml 2 操作手册 1 份 1 份 e t 保存方法 o 试剂盒冷冻运输，试剂盒各组分于-20°C 保存，有效期见包装。 i 产品介绍 b AMV 一步(One Step)法RT-PCR 试剂盒以RNA 为模板，RNA→cDNA→PCR 在同一体系中连续进行，反应过程中无需 添加试剂，无需开盖，避免了污染。一步法RT-PCR 技术可用于RNA 分子的检测和结构分析、cDNA 克隆、RNA 水平上的 特定的基因表达分析等多种领域的应用。 n 本试剂盒采用高质量的AMV 反转录酶和 Taq DNA 聚合酶，以及本公司研发的反应体系，大大提 了反应的扩增性能和 o 特异性。本试剂盒已将RT-PCR 反应中用到的Buffer、dNTP 及体系稳定剂配成10 One Step RT-PCR Buffer，使得实验操 作更加方便。 g 注意事项(操作前请仔细阅读)n 1. RNA 样品要避免基因组DNA 污染。用于cDNA 合成的器具须用0.1% DEPC （焦碳酸二乙酯）水溶液37°C 处理12 h ； a 然后在120°C 高压灭菌30 min 去除残留的DEPC。 2. 用于RNA 实验的试剂，须使用干热灭菌(180°C，60min)或者上述DEPC 处理的器具盛装，使用的无菌水须加入0.1% s DEPC，然后进行高温高压灭菌。建议RNA 实验使用的器具、试剂和无菌水专用。 3. 使用本试剂盒进行 RT-PCR 反应时，应使用基因特异性引物(GSP)，不能使用 Oligo dT 及随机引物，否则将会导致 RT-PCR 生非特异性 物，目标RT-PCR 物的 量也会减少。 4. 当同时进行多次RT-PCR 反应时，应将各种试剂配制成混合液然后分装到各个管中，以减少实验操作或实验之间的误差 （整个反应过程应在冰浴条件下进行）。 5. 本试剂盒中的反转录酶可在37~50°C 条件下正常工作，42°C 为该酶的最适温度。对于富含GC 二级结构的RNA，可以 适当提 反转录的工作温度，但是温度超过50°C RT-PCR 物的得率会有所降低。 6. 对于大多数模板而言，镁离子终浓度在1.2 mmol/L 效果较好，如果需要可用提供的5 mmol/L MgCl 来进一步调节至更