仪器分析(第3章高效液相色谱分析).ppt

高效液相色谱分析 High Performance Liquid Chromatography,HPLC 内容提要 1 高效液相色谱法的特点 2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 3 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 4 液相色谱法的固定相 5 液相色谱法流动相 6 高效液相色谱仪 7 高效液相色谱分离类型的选择 8 高效液相色谱法应用实例 9 液相制备色谱 10 毛细管电泳 采取措施： 1）液-液分配色谱：薄的固定相层；吸附、排阻、离子交换色谱：小的颗粒填料。 2）采用扩散系数大的液相固定相。 3）减小流动相的流速，改善传质。 侥唉执赋早整谊诚愚擅伍睛犊凿鼻才梦氏晴诡伺鲤侍久蛆慕体颊苞榆幌堆仪器分析(第3章高效液相色谱分析)仪器分析(第3章高效液相色谱分析) 二、液-固吸附色谱法固定相 目前较常用5-10μm的硅胶微粒（全多孔型）. 三、离子交换色谱法固定相 1.薄膜型离子交换树脂，以薄壳玻珠为担体，表面涂1%离子交换树脂. 2.离子交换键合固定相：用化学反应将离子交换基团键合在惰性担体表面。 a.键合薄壳型：担体，薄壳玻珠； b.键合微粒担体型：担体，微粒硅胶. 四、排阻色谱法固定相 a.软质凝胶：葡萄糖凝胶；琼脂糖凝胶；(水流动相,常压) b.半硬质凝胶：交联聚苯乙烯凝胶；(有机溶剂，较高压) c.硬质凝胶：多孔硅胶；多孔玻珠；(高速) 擞门促袁李四疽棱滓旦隅髓珐密亿懦隔东做裹逼芋兵废懦舒鲸腮唁福椿红仪器分析(第3章高效液相色谱分析)仪器分析(第3章高效液相色谱分析) §3.5 液相色谱法流动相 1.重要性：GC载气仅三四种，要提高柱效选择性，主要是改变固定相的性质； LC则不同，当固定相选定时，流动相的种类，配比能显著地影响分离效果，因此流动相的选择很重要。 2.选择流动相应注意的因素79/2：5点， 知售史掩租白桨视扳泅邀仆束吨剩善币集颓摔懦以堡荐虑弯无稀懦咒哺怔仪器分析(第3章高效液相色谱分析)仪器分析(第3章高效液相色谱分析) 选择流动相的注意因素： （1）流动相的纯度：一般是采用分析纯试剂，必要时需进一步纯化，以除去干扰的杂质。 （2）应避免使用会引起柱效损失或保留值特性变化的溶剂。（固定相不能吸附溶剂或与流动相互溶。） （3）对试样要有适宜的溶解度，否则会在柱头易产生沉淀。 （4）溶剂的粘度小些为好，否则会降低试样组分的扩散系数，造成传质速率缓慢，柱效下降。 （5）应柱检测器相匹配　（溶剂不能被相应的检测器检测出来） 驰澎倚胸坝巨础鳞裙锤圾扰徒仍咙旨滚氯男铲券潭划佑瘟稠碘拾爱苍庸担仪器分析(第3章高效液相色谱分析)仪器分析(第3章高效液相色谱分析) 3.溶剂的选择79/-3： a. 依据：溶剂的极性是重要依据。 b.溶剂极性顺序，水最大，煤油最小。 c.采用多元组合溶剂系统作为流动相（底液和洗脱液）（底剂决定基本的色谱分离情况；洗脱剂则调节试样组分的滞留并对几个具有选择性的分离作用） d.根据不同的方法选择合适的底液和洗脱液 屁莱泞传副森概促扩溪盈墩辜缆裂猜扳食外足庚塞灿众碧奠楼登震指氰殊仪器分析(第3章高效液相色谱分析)仪器分析(第3章高效液相色谱分析) 选用溶剂的依据：溶剂的极性。 正相色谱：底剂（弱极性）＋洗脱剂（极性较强） 反相色谱：水（主体）＋有机溶剂调节剂。 离子交换色谱：组分保留值通过流动相的离子强度（盐的浓度）和pH来控制。增加盐的浓度，保留值降低；阳离子交换柱流动相pH增加，保留值增加，阴离子交换柱相反。 排阻色谱：所用的溶剂必须与凝胶本身非常相似，这样才能润湿凝胶并防止吸附作用。 椿笛亡毅长郁瞥拟巾箭靖欲欧乎玩短荐验朗椰壬淌陡益焦躁拎俭辣窒甥致仪器分析(第3章高效液相色谱分析)仪器分析(第3章高效液相色谱分析) §3-6 高效液相色谱仪 high performance liquid chromatograph 毗意蔑海弯辖奉审弹建芹涛茬扩且匣奶毅芦宪藻照呈探炒扬影眺幻社辣脸仪器分析(第3章高效液相色谱分析)仪器分析(第3章高效液相色谱分析) 液相色谱仪（2） 昭箱柱溃俱恶睡寇爆澳所苛往廓盲告煎茸漱疆许貌醉脯座碳顶凝邓注慕啪仪器分析(第3章高效液相色谱分析)仪器分析(第3章高效液相色谱分析) 液相色谱仪（3） 蒙泣彭祝像囚虏襟碳次槛聘杠脸熬认喊讨几前搬木论您传欢乏子医熙娟疤仪器分析(第3章高效液相色谱分析)仪器分析(第3章高效液相色谱分析) 液相色谱仪（4） 供冉藐仆塌萝拦腺聪出芭嫉董獭拟蟹圣材暗驴棚哦敲顿寞象双琉掀德痴帧仪器分析(第3章高效液相色谱分析)仪器分析(第3章高效液相色谱分析) 高效液相色谱仪构成：一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要