三、操作方法.ppt

任课教师： 刘军 闫达中 曾万勇 董国清 丁洪波 实验目录 实验1 淀粉的测定—1％盐酸旋光法 实验2 甲醛滴定法测定氨基氮含量 实验3 蛋白质含量测定—双缩脲法 实验4 油脂皂化与皂化值的测定 实验5 温度对酶活性的影响 实验6 血红蛋白的凝胶过滤 实验7 DNA的琼脂糖凝胶电泳 实验8 综合性实验 羧甲基纤维素酶活力及pH值 对酶活力影响 实验9 PCR方法检测转基因农产品大豆、玉米 蛋白质分子中含有多个与双缩脲结构相似的酰胺键，也具有这一反应 反应产物在540nm处有最大光吸收 颜色的深浅与蛋白质（或多肽）的浓度呈正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸的种类无关 因而，双缩脲反应可用测定蛋白质的含量。 实验8 综合性实验 羧甲基纤维素酶活力及pH值 对酶活力影响 一、实验目的 通过设计，学习并了解化学类实验的基本过程与基本方法，培养发现问题、解决问题的能力，养成科学实验的良好习惯。 学习并了解羧甲基纤维素酶的基本特性，学习酶的抽提、最适pH的测定及酶活力测定的方法。 学习还原糖的测定、标准曲线的制作及分光光度计的使用方法。 学习试剂的配制，学习方案的制定与调整、数据的处理及实验报告撰写 二、实验原理 纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖。无论一年生或多年生植物，尤其是各种木材都含布大量的纤维素。植物体内约有50％的碳以纤维素的形式存在。 估计地球上绿色植物每年大约净产有机物15-20×1010吨，其中纤维素占三分之一至二分之一。 棉花、亚麻、芋麻和黄麻部含有大量优质的纤维素。木材中的纤维素则常与半纤维素和木质素共同存在。 1950 年 Reese提出了 C1-Cx概念。C1——水解因子，作用于纤维素的结晶区（如棉花纤维即为高度结晶性纤维），使氢键破裂，呈无定形可溶态，成为长链纤维素分子。（本实验以棉球为材料)Cx通常包括：（1）内切葡萄糖苷酶(endo-1,4-β-D-glucanase，EC3.2.1.4，简称 EG)。这类酶随机水解β-1,4-糖苷键，将长链纤维素分子截短。（2）外切葡萄糖苷酶（exo-1,4-β-D-glucanase，EC3.2.1.91），又称纤维二糖水解酶（cellobiohydrolase，简称 CBH）。这类酶作用于β-1,4-糖苷键，每次切下一个纤维二糖分子 。（3）β-葡萄糖苷酶（β-glucosidase，EC3.2.1.21，简称 BG），这类酶将纤维二糖（水杨素即为葡萄糖苷键连接的纤维二糖）水解成葡萄糖分子。 三、实验要求 根据相关资料，提出实验方案 修订实验方案 实验实施 数据处理与实验报告 四、基本实验过程 提出实验设计 制作还原糖—吸光度的标准曲线； 测定pH对纤维素酶活力的影响曲线及该酶的最适pH值； 测定不同底物时的纤维素酶活力。(C1活力单位\Cx活力单位\Cb活力单位) 五、材料、试剂与仪器 材料：定性试纸、脱脂棉球 试剂：0.1mol/L乙酸溶液、0.1mol/L乙酸钠缓冲溶液、DNS显色剂、1%CMC溶液、水杨素、0.1%标准葡萄糖溶液、纤维素酶溶液 仪器：水浴锅(恒温，50±0.5℃)、722型分光光度计、玻璃制品、冰箱、热干燥箱（80±1℃），分析天平（感量0.1㎎） 六、注意事项 遵守实验室制度，注意操作安全 保持实验室整洁，爱护仪器设施 不懂就请教老师，规范化操作 节约试剂 实验9 PCR方法检测转基因农产品大豆、玉米 一、目的与要求 学习转基因食品检测的原理和方法 二、原理 为了检测常见大豆、玉米样品中是否含有转基因成分，可以通过PCR法检测待测样品基因组中是否含有目前生产转基因植物通用启动子、终止子等序列。本实验采用改进的CTAB法提取大豆、玉米基因组DNA，应用PCR检测方法，以大豆凝集素(Lectin)基因为内参， 花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S启动子)、农杆菌胭脂碱合成酶终止子(NOS终止子)及外源基因5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(CP4-EPSPS)为靶基因检测大豆中的转基因成分。 三、试剂、仪器 (一) 仪器 凝胶成像分析系统，恒温水浴锅，台式高速离心 PCR扩增仪，电泳仪 (二) 试剂 (1) Tris-HCl(1mol/L pH8.0) (2) 0.5mol/L pH8.0 EDTA 1.86g Na-EDTA·2H2O加20mL水，用固体氢氧化钠 节pH至8.0，定溶至10mL。 (3) CTAB缓冲液 10mL Tris-HCl(1mol/L pH8.0)；5mL EDTA(0.5mol/L (pH8.0)