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大肠菌群快速检测纸片介绍 一 大肠菌群和粪大肠菌群的定义 1 大肠菌群： 大肠菌群（Coliform Bacteria)系指一群在37℃ 培养24h能分解乳糖产酸产气的需养或兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。它是细菌卫生学中的一项重要指标。 2.粪大肠菌群： 粪大肠菌群(Faecal Coliform)是大肠菌群中的一部分，在37 ℃和44.5 ℃均能生长并发酵乳糖产酸产气，主要来自粪便。将能在44.5℃生长并发酵乳糖产酸产气的这一部分大肠菌群称为粪大肠菌群。粪大肠菌群数可以作为被粪便污染的评价指标。 总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度为25℃左右，如在37℃培养则仍可生长，但如将培养温度再升高至44．5℃，则不再生长，而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37℃左右生长，如将培养温度升高至44．5℃仍可继续生长。因此，可用提高培养温度方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分。在37℃培养生长的大肠菌群，（包括粪大肠菌群）为“总大肠菌群”(Total coliform)；在44．5℃培养仍能生长的大肠菌群，为“粪大肠菌群”(Fecal coliform)。 二 大肠菌群快检纸片法的检测原理 1.反应系统： ① 大肠菌群细菌在生长繁殖时，分解乳糖产酸 乳糖→→→→葡萄糖 + 半乳糖 葡萄糖→→→→丙酮酸→→→→乙酸 + 甲酸 ② 甲酸→→→→H2 + CO2 2 指示系统： ①产酸会通过溴甲酚紫由紫色变黄色来显示； ②脱下的氢可与无色可溶性氯化三苯四氮唑（TTC受氢体）发生氧化还原反应，形成不溶性红色络合物三苯甲替（Formazan）。 3.大肠菌群快检纸片就是根据上述原理，以无菌层析滤纸为载体，吸附一定量的乳糖、指示剂（溴甲酚紫和TTC）、蛋白胨、抑菌剂等，在无菌条件下恒温干燥制成。大肠菌群细菌通过溴甲酚紫指示剂显示发酵乳糖产酸使纸片变黄，通过TTC与脱下的H发生氧化-还原反应，在细菌生长的菌落处形成红色斑点（或红晕）。这也是现行国标制定阳性结果判定标准的理论依据。 众所周知，酶是一种蛋白质，其活性随温度和pH等变化而改变，在高温和极端酸性或碱性情况下，可完全丧失活性而失去脱氢的能力。因此影响酶活性和导致pH 异常的任何因素均可影响检测结果。 三 大肠菌群快检纸片的种类及其使用方法 1 餐饮具和待测物体表面用纸片： 组成和性状：每份2张5×5cm纸片，干燥纸片为灰白色或淡绿色，加中性水湿润后为青紫色。 适用范围：食（饮）具、公共场所卫生、医院感染等待测物体表面的大肠菌群快速检验。 使用方法： 将纸片用适量无菌蒸馏水浸湿（无多余水分），贴于食饮具内侧表面或其他待测物体表面规定位置，压实，使纸片与物体面充分接触，30秒后取下，平整放于无菌袋内，37℃培养16-18h观察结果。 储存条件：干燥、避光、冷藏，严禁酸性或碱性环境存放。 2 食饮品用大肠菌群快检纸片 组成与性状：每份3袋吸附10ml样品稀释液的大纸片（双层11×11cm）和6袋吸附1ml样品稀释液的小纸片（5×5cm），干燥纸片为灰白色或淡绿色，加稀释样品后为青紫色。 适用范围：冰糕、冰激凌、饮料、豆制品、乳制品、肉制品、糕点、酒类、果汁、汽水、冰块等食饮品中大肠菌群或粪大肠菌群检测。 储存条件：10℃以下冷藏，干燥、避光，严禁酸性或碱性环境存放。 使用方法：根据检样形态及其污染情况的估计，选择3个适宜稀释度，每个稀释度接种3袋。 ①33.3mL接种法：固体、半固体检样，3袋大纸片接种1︰10稀释样品各10mL，3袋小纸片接种1︰10稀释样品各1mL ，另3袋小纸片接种1︰100稀释样品各1 ml。国标要求高、污染指标低的液态样品，也可选择原液10ml，1ml，0.1ml接种量。 ②3.33mL接种法：国标要求低、污染指标较高的液态检样，可直接接种小纸片，3袋小纸片接种原液样品各1ml，3袋小纸片接种 1︰10稀释样品各1 ml，3袋小纸片接种1︰100稀释样品各1 ml。 封闭袋口保湿，于37℃培养18～24h观察结果2次（粪大肠菌群应立即放44.5℃培养）。 水用大肠菌群快检纸片（含污水） 组成与性状：每份5袋吸附10ml水样的大纸片（双层11×11cm）和10袋吸附1ml水的小纸片（5×5cm），干燥纸片为灰白色或淡绿色，加水样后为青紫色。 适用范围：饮用水、矿泉水、地表水、水源水、纯净水、污水等水质检验的大肠菌群或粪大肠菌群检测。 储存条件：10℃以下冷藏，干燥、避光，严禁酸性或碱性环境存放。 使用方法：根据预计的水样中大肠菌群数确定接种量。 ① 55.5mL接种法：水样中大肠菌群数量较少时，接种量为 10mL、1mL、0.1mL，即5袋大纸片接种原水样各10ml，5袋小纸