总大肠菌群.ppt

07工业环保与安全技术 工作流程 理论知识 当环境受到污染后，环境的 物理性质 化学性质 生物学特性 如： 重金属离子、NO3- 浓度增加； 水体污染变质，水生生物种类减少，甚至灭绝； 如何监测？ 化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值； 生物学方法：利用生物种类、数量的变化，生物学特性的改变来监测污染物对环境的影响。 可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映污染物的性质、浓度和数量。 《生活饮用水卫生标准》 2006年12月29日，卫生部、国家标准化委员会发布2006年第12号文件，批准发布《生活饮用水卫生标准》及检测方法国家标准。标准自2007年7月1日起实施，其中《生活饮用水卫生标准》中非常规指标的实施项目和日期有省级人民政府根据当地实际情况确定。 全部指标最迟于2012年7月1日实施。 饮用水中微生物指标 新国标常规项目限值变化 总大肠菌群 当饮用水受到粪便等污染，就有可能带有沙门氏菌、志贺氏菌、弧菌、肠道病毒等，且它们均可以水为媒介引起肠道传染病。 总大肠菌群含量可表明水体被污染的程度，并且间接地表明肠道病菌存在的可能，以及对人体健康具有潜在危险性。 粪大肠菌群 粪大肠菌为总大肠菌群的一个亚种；直接来自粪便，除了它耐热，在44-44.5℃的高温条件下仍可生长繁殖并将色氨酸代谢成吲哚，其他特性均与总大肠菌群相同。 由于总大肠菌群既包括粪便污染，同时也包括非粪便污染的大肠菌总数，因此，有必要在饮用水标准中增加粪大肠菌群这个指标，以便直接反映出水体是否受到粪便污染的信息，进一步确保流行病学的安全。 粪大肠菌群检测方法注解 ??? 总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度为25℃左右，如在37℃培养则仍可生长，但如将培养温度再升高至44.5℃，则不再生长，而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37℃左右生长，如将培养温度升高至44.5℃仍可继续生长。 因此，可用提高培养温度方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分。在37℃培养生长的大肠菌群，包括在粪便内生长的大肠菌群称为“总大肠菌群”(Total coliform)；在44.5℃仍能生长的大肠菌群，称为“粪大肠菌群”(Fecal coliform)，粪大肠菌群细菌在卫生学上具有重要的意义。 目的： 1.学习水样的采取方法和水样总大肠菌菌群测定的方法； 2.了解水源水的平板菌落计数的原则。 水中总大肠菌群的测定 一、测定意义 实验原理： 目前检测大肠菌群的标准分析法是多管发酵法。 多管发酵法包括初步发酵试验，平板划线分离和复发酵试验三部分。 水中总大肠菌群的测定 总大肠菌群:指那些能在37℃ 48h之内发酵乳糖产酸产气的、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。 主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。 水中总大肠菌群的测定 一、多管发酵法 水源水大肠菌群的测定 (2) 水源水：将水样作1：10稀释 水源水大肠菌群的测定 (3) 地表水和废水：水样应作1:10，1:100，1:1000或更高的稀释 水源水大肠菌群的测定 1.初发酵试验 水源水大肠菌群的测定 2.复发酵试验 检测操作方法 检品取样 1.水体取样： 应取距水面10～15cm的深层水样。先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。 2. 自来水取样： 打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用烧杯接取自来水。 检品取样 3. 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混匀）、自来水样不稀释。 注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入9mL灭 菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。 培养基配制 品红亚硫酸钠培养基平板及典型菌落 伊红美蓝培养基 　蛋白胨 10g 　乳糖 10g 　磷酸氢二钾 2g 　琼脂 20~30g 　蒸馏水 1000ml 　2%伊红水溶液 20ml 　0.5 %美蓝水溶液 13ml 灭菌与消毒 1.加热已经配制好的固体培养基（肉膏蛋白胨琼脂培养基），使固体培养基溶化。 2.倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，放置桌面待其凝固。 3.用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微生物，待其冷却后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。 5. 倒置于3