氧化槐定碱的镇静作用研究 2.doc

宁夏医科大学 医学科研方法课开题报告 学号： 201300226 姓名： 吴疆 研究方向： 骨关节外科学 论文题目：Anti-ccp在类风湿性关节炎中表达的实验研究 院系： 临床医学院 入学时间：2013年09月01日 开题时间：2013年11月19日 Anti-ccp在类风湿性关节炎中表达的实验研究 一、研究背景 类风湿性关节炎是一种病因不明的自身免疫性疾病，多见于中年女性，我国患病率约为0.36%-0.42%。主要表现为对称性、慢性、进行性多关节破坏。关节滑膜的慢性炎症、增生、形成血管翳，侵犯关节软骨、软骨下骨、韧带和肌腱等，造成关节软骨、骨和关节囊破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。许多类风湿关节炎病人晚期全身关节变形，骨质疏松，生活不能自理，全身多关节不能自由活动，关节僵直，接近瘫痪，严重影响了病人的生活质量。因此早期诊断至关重要。1987年美国风湿病协会制定了类风湿关节炎(RA）的诊断标准，类风湿因子(RF)是唯一指标。但在健康的老年人中仍然可呈阳性，特异性相对较低。抗环瓜氨酸肽（Anti-cyclic citrullinated peptide,ACCP)抗体是近几年在类风湿关节炎患者血清中发现的一中自身抗体，尤其有利于RF阳性和临床不典型患者诊断。 二、目的和意义 1检测类风湿关节炎患者血清，关节液，滑膜中的抗CCP的浓度水平值， 2探讨其在类风湿关节炎中的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值对 类风湿关节炎的诊断价值。 3探讨抗CCP抗体与患者年龄、病程时间、类风湿关节炎疾病活动指数（DAS28）积分，HHS评分，晨僵时间及实验室指标CRP、ESR、RF之间的关联性，评价其对RA诊断、改善预后的意义 4探讨滑膜组织中抗CCP抗体与HLA-DR4/1的关系。 三、研究对象及分组： 1、研究内容： 选取类风湿性关节置换病人作为实验组（N=20），选取其他类型的膝关节置换病人作为对照组（N=20）。应用ELISA方法分别测定病人血清、关节液、滑膜中抗CCP抗体和免疫组化法测定RF。 实验分组：取类风湿关节（实验组N=20）和其他类型的膝关节置换病人（对照组N=20），术前抽取病人血清，人工膝关节表面置换术中六区关节液及切除病变膜组织。术后抽取血清。 2、实验方法 采用PCR-RFLP技术，RA患者HLA-DR4/1分型，取以盐析法提取滑膜组织DNA，经紫外可见风光光度仪测定含量及纯度，A260/280在1.7~1.8范围内。以序列特异性引物扩增DNA，所用试剂盒为高分辨HLA-DRB1 SSPUniTrayKit聚合酶链反应(PCR）反应条件参照试剂盒中的PCR扩增程序。扩增产物在2%的琼脂糖凝胶以150V稳压电泳10MIN，紫外检测仪观察结果，与试剂盒中的标准读纸板确定等位基因，等位基因的命名序列按2001年WHO公布的方法。 四、技术路线 技术路线图 五、可行性分析 实验组标本选取宁夏医科大学附属医院骨科和宁夏人民医院骨科每年平均进行大量的人工膝关节表面置换术可以满足实验组标本的采集，对照组拟选用膝关节置换术手术病人满足本实验所需样本数量。 我校中心实验室配备有分子生物学实验室、免疫实验室、图像分析室等多个专门的研究室。实验所需的各种试剂和药物均可从国内外公司购买，具备完成本课题条件。 六、创新性 现在国内外诊断类风湿性关节炎检验抗CCP抗体，都是在血清中检查，对血液中检测抗CCP抗体阴性的病人不能排除类风湿性关节炎的可能性，尚未在关节液和滑膜中检测的报告，若能在关节液和滑膜中检测到抗CCP抗体含量高且特异度和灵敏度较高，额可以调高病人的诊断率。 预期结果 可提高风湿性关节炎病人的诊断率，检测类风湿性关节病人的滑膜中抗CCP抗体的含量，为进一步研究类风湿性关节病人化膜病变抗体因子检测做好准备。ANTI-CCP与RA骨关节破坏及RA的发病机制方面研究能够有所进展。 撰写并发表与本课题相关的论文1-2篇。 七、时间进度 预计于2013年10月-2014年10月区间完成实验。 2013年10月-2013年11月 文献检索，资料查新，撰写综述，实验设计，联系仪器使用。 2013年12月-2014年5月 收集病例，样本采集，购买试剂及配套设备，预实验，标化实验条件 2014年6月-2014年9月 实验技术指标测定，争取按计划完成实验室工作 2014年10月 工作总结，整理分析资料，统计学处理，论文撰写