桃离体组织分化再生植株的研究-园艺学报.PDF

园　艺 　学 　报 　2001 , 28 (4) : 342～344 Acta Horticulturae Sinica 桃离体组织分化再生植株的研究 1 1 2 1 , 张永庆 　陈大明 　金勇丰 　张上隆 (1 2 ) 浙江大学园艺系 , 杭州 310029 ;　 浙江大学生物化学研究所 , 杭州 310029 摘 　要 : 以奉化 ‘玉露’桃叶片 、幼茎 、下胚轴 、子房 、胚珠 、胚乳及花后 45～50 d 和 75 d 的未成熟胚 、完全成熟的种胚为外植体 , 进行离体培养再分化试验 。结果表明只有花后 45～50 d 和 75 d 的未成熟胚产生白色致密节球状的愈伤组织 , 并可诱导出不定芽 , 不定芽分 化率分别为 73 . 8 %和 15. 5 % ; 6BA 诱导愈伤组织不定芽的效果优于 KT 。不定梢转移生根成 苗获得了完整的再生植株 。探讨了不同激素和碳源等对不定芽诱导的影响 。 关键词 : 桃 ; 外植体 ; 愈伤组织 ; 再分化 ; 再生植株 ; 组织培养 中图分类号 : Q 813 ; S 662 . 1 　文献标识码 : A 　文章编号 : 0513353X (2001) 1 　目的、材料与方法 ( ) 〔1～3 〕 〔4 〕 国内外学者对桃 〔Prunus persica L . Batsch 〕离体分化培养 和遗传转化 作了不 少研究 。但较多且较为成功的是用于快速繁殖上的茎尖或器官培养 , 而通过分化途径再生 植株的报道不多 。奉化 ‘玉露’桃品质优良, 但不耐贮运 , 作者以其为材料建立再分化频 率高且培养方法简单的再生体系 , 旨在为利用转基因技术进行品种改良打下基础 。 以杭州市大观山果园树龄约 15 年的奉化玉露桃花 、茎 、叶、果为试材 。 外植体的采集与消毒 : 幼叶、幼茎经稀吐温漂洗 15 min , 无菌水漂洗 3 次 , 0 . 1 %升 汞灭菌 5 min , 无菌水漂洗 5 次 ; 1 年生茎段经稀吐温漂洗 15 min , 70 %酒精浸 0 . 5 min , 无菌水漂洗 3 次 , 0 . 1 %升汞灭菌 5 min , 无菌水漂洗 5 次 , 无菌去皮 ; 花期子房经水冲 洗 , 0 . 1 %升汞灭菌 3 min , 无菌水漂洗 5 次 ; 幼果 、成熟果或桃核经稀吐温漂洗 15 min , 70 %酒精浸 0 . 5 min , 无菌水漂洗 3 次 , 去果皮取出种子 , 0 . 1 %升汞灭菌 5 min , 无菌水 漂洗 3 次 , 无菌剥取胚乳 、种胚 。愈伤组织的诱导 : 幼叶剪取 0 . 5 cm 大小 , 茎段长 1 cm 左右 , 未成熟胚和成熟胚则于胚芽处切割 。所有外植体分别接种于愈伤组织诱导培养基 (MS + 2 ,4D 0 . 1 mg/ L + NAA 0 . 5 mg/ L + 6BA 0 . 1 mg/ L) 中 , 置于26 ℃和 16 h 光周期或连 续黑暗条件下培养 。愈伤组织的继代和分化 : 为保持愈伤组织的胚性状态 , 愈伤组织接种 于无 2 ,4D 、含低浓度 6BA (0 . 1 mg/ L) 或 KT 、较高浓度 NAA ( 1. 0 mg/ L) 的MS 固体培 养基中 , 每 28 d 继代 1 次 。为使愈伤组织分化不定芽 , 愈伤组织被置于富含 6BA 或 KT 或附加其它成