水蛭素在噬菌体表面的展示.pdf

卷 期 生 物 工 程 学 报 # =?:#.: 年 月 !#$%%’()*$+,( .#(/%0$(,( @ABCA4 - 12 D 水蛭素在噬菌体表面的展示! 周 育 秦华夏 徐劲松 黄仪秀 朱圣庚 （北京大学生命科学学院 北京 ） %%$( 摘 要 水蛭素是凝血酶强有力的天然抑制剂。通过改造噬菌质粒并构建水蛭素表达载体 ，使水蛭素基因通过接头与噬菌体 的 （ ）基因片段融合。 ,-./-0#1$)234 5! ! (!7%’ + 6+ 表达产物在 信号肽的引导下到达大肠杆菌周质，在辅助噬菌体 的帮助下组装 $ 5!89( 6+ 到丝状噬菌体外壳上。展示在噬菌体表面的水蛭素仍然具有与凝血酶结合并抑制酶活性的 作用，说明展示的水蛭素保持了正确的空间构象和生物学活性。水蛭素在噬菌体表面的功成 展示为进一步开展其实验定向进化以及结构与功能关系的研究打下基础。 关键词 水蛭素，噬菌体展示，融合蛋白，重组噬菌体，凝血酶活性的抑制 分类号 文献标识码 文章编号 （ ） !:7$ - %%%)!%’ %)%%!#)7% 噬菌体表面展示是一种新的生物技术，它使表达的外源蛋白或多肽以融合蛋白的形 式展现在噬菌体表面，并可保持相对独立的空间构象和生物活性。大肠杆菌丝状噬菌体 的主要外壳蛋白 和少数外壳蛋白 分别以 端附着在噬菌体颗粒上，而其 5! $ ! , . 6+ 6+ 端则暴露在外。因此，外源蛋白或多肽可以与 或 蛋白的 端融合，经信号肽引 $ ! . 6+ 6+ ［ ］ 导至周质并组装到噬菌体颗粒上 !7 。 蛋白因其序列中含有 或 的重 ! ;111 ;1111 6+ 复而具有空间结构的灵活性，因此更适于在.端展现大的多肽链而不影响其空间结构。 位于丝状噬菌体尾端，具有识别和吸附大肠杆菌性菌毛的功能，为解决 融合蛋白 ! ! 6+ 6+