生物活性物质31141.doc

薯蓣皂苷摘 要：,近年来尤以选择高效、低毒、环保的薯蓣皂苷的提取分离技术和抗肿瘤活性及其机制的研究关注程度较高。综述了近年来薯蓣皂苷提取分离和抗肿瘤活性方面的研究进展。 【关键词：生物活性物质；薯蓣皂苷1．引言　　(dioscin) 系从薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Makino、盾叶薯蓣( Dioscorea zingiberensis)或穿龙薯蓣( Dioscorea hipponica) 、黄山药( Dioscorea pan2thaica Prain et Burkill) 等植物根茎中提取的一类甾体皂苷,其水解产物为薯蓣皂苷元(diosgenin ,Dio) 。Dio 为片状或针状结晶,熔点204～207 ℃, [α]23D 为- 129°(C = 1. 4 ,氯仿) ,可溶于常用有机溶剂及醋酸中,能与洋地黄皂苷生成沉淀。Dio 作为合成多种甾体激素和甾体避孕药比较理想的前体,其应用前景非常广阔。现代药理研究表明,薯蓣皂苷及其衍生物具有免疫调节、降血脂、抗衰老、抗氧化、抗关节炎、保护胃黏膜、祛痰、溶血、脱敏、灭钉螺、抗肿瘤、抗艾滋病、抗血小板聚集、增强心脏收缩力、减慢心率、抗动脉硬化、改善微循环等多种药理活性[1 - 5] 。近年来尤以选择高效、低毒、环保的薯蓣皂苷及其苷元的提取分离技术和抗肿瘤活性及其机制的研究关注程度较高。薯蓣皂苷在一定程度上能够消除活性氧，保持细胞膜结构的完整性。,以期对薯蓣皂苷的新药研发提供参考。 2．薯蓣皂苷提取分离 2.1直接酸水解法　20世纪50年代末,我国采用Rothrok首创的直接酸水解法生产薯蓣皂素的工艺[6] 。由于直接酸水解法设备相对简单,研究得较为成熟,实际应用较普遍。即把原料浸泡粉碎加酸加热水解,然后用有机溶剂提取。其流程为:原料浸泡—酸水解—洗涤—甩滤—干燥—提取—结晶—成晶[7]。丁惠玲等[8]改进了薯蓣皂苷的水解方法,取穿山龙碎块50g加硫酸(φ = 8% )溶液浸泡24h后,于高压锅中加压水解(101. 3～141. 8kPa, 120～126℃)2h,放凉后取出,过滤,其他步骤同常规酸水解法。通过实验的改进,由原来水解时间6h,缩短为2h,不仅节约用电,减少仪器的损坏,而且能正常的完成实验。从提取得到的产品薯蓣皂苷元的量可看出,收率提高将近1倍,降低了实验成本。但本法提取工艺操作繁琐,需要在高温高压下水解,能耗高,生产周期长,成本高,且提取物中杂质含量高,需要脱色、多次的重结晶工艺,纯化步骤多且难度大,收率低。此方法是应用最普遍的。 2.2　超临界CO2 ( SC - CO2 )萃取法　超临界流体萃取系统具有较快的传质和萃取速度,是近年来新兴的萃取手段之一,具有无污染、效率高等特点[9] ,与有机溶剂法相比更经济、更安全,在实现工业化生产方面具很大的潜力。陈钧等[10]对穿山龙中薯蓣皂苷元进行了SC - CO2 提取实验研究:将药材粉碎, 60℃干燥8h后,置高压反应釜中,加压水解。水解完毕,将水解物取出,加饱和石灰水中和至pH =7,真空抽滤,滤渣用蒸馏水洗涤3次, 80℃下干燥。将干燥物粉碎,在预先设定的萃取条件下浸泡6h,然后等温萃取,溶有薯蓣皂苷元SC - CO2 经针阀节流后进入分离器中,实现薯蓣皂苷元的分离。萃取物每隔1h采样1次,直至萃取完全。 3．薯蓣皂苷的抗肿瘤作用研究 1 　材料和方法 1. 1 　动物　4 种肿瘤腹水传代小鼠,均购自吉林省肿瘤研究所。昆明种小鼠,18～22 g ,雌雄兼用,购自中国人民解放军农牧大学实验动物中心(动物合格证号:1025112) 。 1. 2 　试剂与药品　薯蓣皂苷元粉,纯度 90 % ,由吉林天然药物研究所提供。注射用环磷酰胺,每支200 mg ,批号980101 ,上海华联制药有限公司产品。DMSO( Gibco) ,MTT ( Sigma) ,52氟脲嘧啶(52FU) ,批号010114,上海旭东海普药业有限公司产品。 1. 3 　细胞株　MCF , A3752S2 购自美国ATCC(American Type Culture Collection) ,L929 , HeLa 由日本横滨市立大学医学部惠赠。 1. 4 　细胞培养　RPMI21640 培养液,加入10 %的胎牛血清,1 %的抗菌素( 1 0 0 0 0U·mL - 1 青霉素和1 000 μg·mL - 1 ) ,2 mmoL ·L - 1 谷氨酰胺,置于5 %的CO2 培养箱中培养。 1. 5 　仪器　CO2 培养箱(RCO3000TVBA ,Revco) ;光学倒置显微镜(37XA8 ,Olympus) ;酶标仪(M450 ,BIORAD) 。 1. 6 　方法 1. 6. 1 　体内抗肿瘤实验方法[