第18章分子遗传学研究方法.ppt

2. 细菌。 --克隆 --转座 --DNA重组 --细胞分析 细菌生长曲线 携带F质粒的细胞的3种形态 --一般性转导 --专一性转导 --基因的基本特征特性 噬菌体介导的一般性转导 转座子引致的插入性突变 转座子引起的lacZ融合 3. 酵母。 --遗传分析 --精确突变 芽殖酵母的生活周期 酵母的重组性转化 酵母有丝分裂细胞周期 4. 拟南芥。 --单倍体与二倍体相转换迅速 --反向遗传中易于转化 --表观遗传 拟南芥生活周期的相 5. 线虫。 --快速生活周期 --细胞系研究 --细胞凋亡 --RNAi 线虫的生活周期 线虫体节 6. 果蝇。 --生长周期快 --首先定位的基因组 --致死研究 --遗传嵌合体 果蝇生活周期 果蝇幼虫发育的设想方向 遗传图、多线染色体、缺失定位 雌雄异体 杂交劣生 FLP-FRT P-元件转化 7. 小鼠。 --胚胎发育与基因敲除 第十八章 分子遗传学研究方法 1. 核酸的研究方法 2. 蛋白质的研究方法 3. 蛋白质组学 4. 核酸-蛋白质互作 5. 模式生物 本章内容 一、核酸的研究方法 1. 通过凝胶电泳按其大小分离DNA和RNA分子。 脉冲凝胶电泳 2. 限制性内切酶在特定位置切割DNA分子。 限制性内切酶EcoRI对DNA片段的消化 一些限制性内切酶及其识别序列 不同内切酶的识别序列与切割位点 EcoRI位点的切割 3. DNA杂交可以用于鉴别特异性DNA分子。 --杂交（hybridization） --探针（probe） 4. 杂交探针可以鉴别电泳分离的DNA和RNA。 --Southern blot hybridization --放射自显影（autoradiogram） 5. 特异性DNA片段的分离。 6. DNA克隆。 --DNA克隆（DNA cloning） --插入DNA Southern blot 7. 质粒载体的DNA克 隆。 --质粒（plasmids） --DNA连接酶 --表达载体 8. 载体DNA可以通过转化导入宿主生物中。 9. 通过克隆可以构建DNA文库。 --基因组文库 --cDNA文库 --反向转录 10. 杂交可以用于鉴别DNA文库中的特异性克隆。 11. 化学合成寡合苷酸。 12. 体外可以通过DNA复制的重复路径实现聚合酶链式反应扩增DNA。 聚合酶链式反应（PCR） 13. 巢式DNA片段组揭示核苷酸序列。 DNA测序中使用的双脱氧核苷酸 存在双脱氧核苷酸情况下的链终止 链终止法进行DNA测序 DNA测序凝胶 14. 散弹对一个细菌基因组进行测序。 15. 散弹策略可以允许一个大的基因组序列进行组装。 全基因组文库的构建与测序策略 通过测定大片段DNA末端序列连接各个contig 16. 末端配对策略可以组装大的基因组scaffold。 一个含有长度5 kb的随机 基因组DNA插入的散弹 文库 17. 1000美元人类基因组可以做到。 454测序仪器上的单个孢子图 二、蛋白质的研究方法 1. 特异性蛋白可以从细胞抽提物中纯化。 2. 纯化一种蛋白需要一种特异性方法。 3. 含有活性蛋白的细胞抽提物的制备。 4. 用柱状层析可分离蛋白质。 --离子交换层析 --凝胶过滤层析 6. 附着层析有助蛋白纯化的速度提高。 --附着层析（affinity chromatography） --免疫附着层析（immunoaffinity chromatography） --免疫沉淀（precipitation） 7. 聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白质分离。 --SDS SDS凝胶电泳图 8. 抗体可用于测定电泳分离的蛋白质。