ligase high 说明书.pdf

08-03 -DNA Ligation Kit- Ligation high (Code No.:LGK-100) 使用说明书 科研用 TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN 目 录 [1] 前言1 [2] 操作程序1 1．使用方法1 2．进行高效连接1 *1 [3] LIGATION HIGH的特征 2 1．优良的连接反应效率2 2．少量液体便可进行反应2 3．优良的稳定性2 [4] 实例3 1．插入连接3 2． LINKER连接4 3．噬菌体连接5 4．通过电泳进行确认 6 5．盐浓度的影响7 [5] 相关产品一览表8 【 注意 】 本试剂盒包含的试剂均为研究用试剂，请不要当作诊断和临床试剂使用。 在本试剂盒使用过程中，请务必严格遵守实验室的各项注意事项，注意安全。 2 [1] 前言 DNA 片段的连接反应是在遗传基因操作实验中的常用操作。在以往的连接 反应中，要根据不同的底物设置不同的条件，还要分别添加各自不同的反应组成 成分，比较复杂麻烦。另外，在进行插入连接时，要得到较高的转化效率也十分 困难。 因此，东洋纺公司为了解决此类问题，开发了操作简便而高效的试剂盒。本 试剂盒的反应液中包括了所有连接反应所需要的试剂，适用于多种类型的连接反 应。另外，本说明书介绍了使用 Ligation high 时的标准结果。 [2] 操作程序 1．使用方法 ·请将本品保存在-20℃以下环境中。 ·在冰上使Ligation high 融解。将其放置在冰上 5-10 分钟便会自然融解。 ·配制准备连接用的DNA 溶液。 ·取DNA 溶液加入等量至半量的 Ligation high ，混匀。 ·在16℃下反应 30 分钟。 ·反应完成后，其反应液可以直接使用于转化。 2．进行高效连接 ·连接效率较低时，使用乙醇沉淀等提纯DNA 。 ·要控制反应液量时，可减少DNA 液体的使用量，和相当于其半量的 Ligation high 进行混合。(参照第二页) ·注意在活性细胞中添加大量的反应液会降低转化的效率。需要添加大量反应 液时，要先用乙醇沉淀等将 DNA 进行浓缩。 ·连接效率受盐浓度的影响。要进行高效率的连接反应时，先用不含盐的TE buffer*1将DNA溶解后再进行连接反应。(参照第 7 页) *1 10mM Tris-HCI, pH8.0/1mM EDTA 1 东洋纺（上海）生物科技有限公司 [3] Ligation high的特征*1 1．优良的连接反应效率 和单独使用 T4 DNA Ligase 相比能获得 50 倍以上的效率。 2．少量液体便可进行反应 将等量到半量的 Ligation high 和 DNA 溶液混合使用。 图 1 体积比的不同(DNA 溶液:Ligation high)导致的转换效率的不同 3．优良的稳定性 即使反复进行 50 次冻结和融解仍然未见连接效率下降。 稳 定 性 图2 冻结融解对