第十六章高效液相色谱.ppt

加注各自的优缺点 第十六章 高效液相色谱法 Rheodyne公司 16.1 概 述 16.1.1 HPLC与经典液相色谱比较 1. 柱寿命长 2. 分离效率高 3. 分析时间短 4. 进样量小 5. 检测灵敏度高 1. 应用范围不同 2. 流动相作用不同 3. 色谱柱不同 4. 检测器不同 5. 样品制备性能不同 16.1.2 HPLC与气相色谱 16.2 高效液相色谱仪组成 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、数据处理系统 16.3 高压输液系统 组成：贮液罐、脱气装置、高压输液泵、及梯度洗脱装置等 核心部件为高压输液泵。 16.3.1 贮液罐及脱气装置 惰性材料制成 坚固 易清洗 有足够的容积 超声脱气 氦气脱气 真空脱气 在线脱气 贮液罐: 脱气方法： 在线脱气装置 16.3.2 高压输液泵 a. 流量要恒定，无脉动并具有较大的调节范围。 b. 应有足够的输送压力，能在高压下连续工作。 c. 能抗溶剂、耐酸、耐碱腐蚀的特点 d. 泵的死体积要小以便于更换溶剂和进行梯度洗脱。 要求： a. 单柱塞泵 偏心轮 密封垫 溶剂出口 溶剂进口 单向阀 b.双柱塞补偿泵 16.3.4 梯度洗脱装置 洗脱方式——等度和梯度两种。 高压泵 高压泵 高压泵 高压梯度 低压梯度 梯度洗脱剂 混合阀 混合阀 梯度洗脱装置——低压梯度和高压梯度装置。 16.4 进样系统 要求： 良好的密封性 最小的死体积 最好的稳定性 进样时对色谱系统压力、流量影响较小。 16.4.1 阀进样 16.4.2 自动进样 16.5 分离系统 16.5.1 色谱柱 色谱柱、柱温箱和连结管 16.5.2 高效液相色谱法分类 根据所使用的固定相分： 1、液固色谱法——固定相是固体吸附剂 2、液液色谱法——固定相是液体 3、化学键合相色谱法——固定相是化学键合的载体 根据所使用的固定相和流动相性质分： 1、正相色谱法 2、反相色谱法 固定相为极性固定相，流动相为非极性溶剂。 正相色谱法应用：分离极性化合物。 固定相为非极性固定相，流动相为极性溶剂。 反相色谱法应用：分离非极性到中等极性化合物。 16.5.3 固定相 a.粒径较小且分布均匀； b.机械强度高，耐压； c.传质速度快； d.化学性质稳定，不与流动相发生反应。 高效液相色谱法固定相的要求： 多孔外壳 实心核 1.5 -10m m （1）表面多孔固定相(硅胶) 孔径：80～300? （2）全多孔微粒固定相(硅胶) Zorbax专利的硅珠堆砌技术 化学键合相的优点： 1、使用过程中固定相不流失； 2、化学性能稳定； 3、热稳定性好； 4、载样量大； 5、适合作梯度洗脱。 （3）化学键合固定相 化学键合相种类 1、非极性键合相 键合相的表面基团为非极性烃基，C18，C8，常用于反相色谱。 2、弱极性键合相 常见的弱极性键合相有醚基键合相和二羟基键合相。 3、极性键合相 常用氨基、腈基键合相，一般作为正相固定相使用，但有时也用于反相色谱。 4、离子型键合相 采用二元或多元溶剂系统 底剂 + 洗脱剂 流动相组成 正相色谱 底 剂：低极性，如，正己烷、正戊烷等。 洗脱剂：极性较强，如，二氯甲烷、氯仿等。 反相色谱 底 剂：强极性，如，水。 洗脱剂：较强极性，如，甲醇、乙腈、四氢呋喃。 16.5.4 流 动 相 加注各自的优缺点