利用正交设计优选NR2A的Western Blot成像条件.pdfVIP

第 25卷 第 1期 化 学 研 究 中国科技核心期刊 2014年 1月 CHEM ICAL RESEARCH http：／／hxya．chinajourna1．net．ca 利用正交设计优选 NR2A的WesternBlot成像条件 高岚岳，苑 洁，姜 泓 (中国医科大学 公共卫生学院，辽宁 沈 阳 110001) 摘 要：采用L。(3)正交设计法，测定了不同光圈、焦距、曝光时间下成像的条带和背景灰度值 ，探讨了光圈、焦 距、曝光时间对 NR2A 的WesternBlot成像效果的影响．结果表明，光圈和曝光时间的影响具有显著性，NR2A 的最佳成像条件是光圈为4mm、焦距为 30mrn、曝光时间为 60S． 关键词 ：正交设计 ；NR2A；WesternBlot；CCD成像 中图分类号：R-331 文献标志码 ：A 文章编号 ：1008—1011(2014)01—0082—04 Optimization ofW esternBlotimagingofNR2A byorthogonaldesignmethod GAO Lanyue，YUAN Jie，JIANG Hong (CollegeofPublicHealth，ChinaMedicalUniversity，Shenyang110001，Liaoning，China) Abstract：L9(3)orthogonaldesignmethodwasadoptedtodeterminethegrayvaluesofbands andbackgroundinrelation tovariousimagingconditionsincludingaperture，focallengthand exposuretime．Theeffectsofaperture，focallengthandexposuretimeon theW esternBlot imagingofNR2A wereexplored．Ithasbeenfoundthatapertureandexposuretimeareofsig— nificanceintermsoftheireffectsontheimagingefficacy．ThebestimagingconditionsofNR2A aredeterminedasapertureof4mm ，focallengthof30mm ，andexposuretimeof60S． Keywords：orthogonaldesign；NR2A；western—blot；CCD imaging WesternBlot中文称为蛋白质印迹法 ，是蛋 白质分析的最流行的技术之一 ，现己广泛应用于基因在蛋 白 水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等方面．WesternBlot测定结果采用 目的蛋白的灰度值计算 法，在 自动曝光成像过程 中，常由于背景干扰大的原因，而出现测量结果不准确及测定结果重现性差等问题． 为保证 良好的成像质量及准确度、重现性好的条带灰度值，有必要对成像条件进行优化，以确保Western Blot结果的准确性。 NR2A是兴奋性氨基酸谷氨酸的特异性受体(NMDA受体)的调节亚单位之一，具有调制突触传递、触 发突触可塑性以及参与学习与记忆等重要的生理功能_1]．在前期研究中，作者通过调整蛋 白上样量 、电泳 和转膜条件、封闭时间、一抗和二抗稀释倍数用以增强杂交信号、降低背景．但采用 自动曝光的凝胶成像系 统，NR2A成像结果仍然不理想，所以本研究采用手动曝光的凝胶成像系统，以双指标 (条带灰度值和背景灰 度值)进行综合评价优化NR2A 的成像条件 ，以期得到理想的成像结果． 本研究以NR2A为切入点，研究其最佳成像条件，采用正交实验法，对影响条带灰度值和背景灰度值的 因素如光圈(A)、焦距(B)、曝光时间(C)等进行考查；探讨NR2A