实验动物的一般操作技术.PDFVIP

实验动物的一般操作技术 一、目的意义 学习掌握实验动物的一般操作技术：动物捉拿固定，雌雄鉴别，动物标记，常用染毒方 法，生物材料采集，动物处死，解剖取脏器等。 二、实验材料 大、小鼠笼； 线手套；大、小鼠灌胃针； 1ml 注射器； 毛细玻璃管； 纱布； 搪瓷 盘； 大鼠固定器； 解剖板； 解剖剪子、镊子； 代谢笼及粪尿分离器；苦味酸酒精饱和液； 品红酒精饱和液。 三、实验内容及操作方法 1. 实验动物选择 （1）基本原则：对受试物敏感、代谢方式与人类接近、经济易得、便于饲养管理及实 验操作、自然寿命不太长。 （2 ）种属选择：选择最敏感的动物。 （3 ）品系选择：根据实验目的选择 近交系；杂交群；封闭群。 （4 ）按微生物等级选择：普通动物；清洁动物；无特定病原体动物；无菌动物。 （5 ）个体选择：年龄；性别；生理状态；健康状况。 2. 实验动物捉拿固定 （1）小鼠 右手抓取鼠尾，置于鼠笼或实验台面上向后拉，左手食指、拇指捏住小鼠耳 后枕部皮肤，将鼠体置于左手掌中，尾巴用无名指和小指压住即可。 （2 ）大鼠 方法与小鼠基本相同，应带线手套。 3. 实验动物性别鉴定 大、小鼠 根据肛门和生殖器的间距 远者为雄性 近者为雌性 成年雄鼠会阴处可见睾丸 雌鼠胸腹部可见乳头 4. 实验动物的标记与编号 （1）染色法 用品红（红色）和苦味酸（黄色）的酒精饱和液在被毛不同部位染色； 用红色代表十位，黄色代表个位，可标记 1-99 号。 （2 ）耳缘孔口法 5. 实验动物染毒途经和方法 （1）胃肠道染毒 喂饲、灌胃与吞咽胶囊 灌胃：将灌胃针吸入药液；左手固定动物，右手持注射器将灌胃针从口角插入动物口腔， 轻压头部使口腔灌胃针与食道成一条直接，沿咽后壁中线向后方徐徐插入，无阻力，鼠不挣 扎呼吸正常且伴吞咽动作说明插入食道。 （2 ）经呼吸道染毒 静式吸入染毒、动式吸入染毒、气管内注入 （3 ）经皮染毒 浸尾法（定性） 班贴法（定量） （4 ）注射染毒 腹腔注射、皮下注射、皮内注射、肌肉注射、静脉注射。 腹腔注射：固定动物于腹部下外侧 1/3 处刺入皮下（向头部 30 度左右），使针头向前推 进 0.5cm，再以45 度角穿过腹肌，刺入腹腔，无回血即可注射。 6. 生物材料的采集 （1）采血方法： 鼠尾采血法；眼眶静脉丛采血；摘眼球采血法；腹主动（静）脉采血； 心脏采血；断头采血；免耳缘静脉采血。 眼眶静脉丛采血：左手拇指、食指紧握大（小）鼠颈部，压迫颈部两侧使眶后静脉丛充 血，右手持毛细玻璃管从一侧眶内眦部以 45 度刺入，捻转前进，感有阻力就抽出管调整方 向后再刺入，至出血为止。 （2 ）粪尿收集：大、小鼠可用代谢笼，对半衰期短的受试物可在全麻下经尿道或腹壁 托管至膀胱收集尿液。 （3 ）胆汁采集 7. 动物处死 （1）暴力处死： 击打法；脊椎脱臼法：左手按住鼠头，右手抓住鼠尾猛力往后拉，使 动物颈椎拉断而立即死亡。多用于处死小鼠。 （2 ）空气栓塞法 （3 ）急性大失血法 （4 ）麻醉处死 （5 ）断头处死 8. 实验动物的解剖检查 （1）大体解剖：动物处死后，采用胸腹腔脏器联合取出法。观察脏器的外形、表面情 况、颜色、大小、质地。对指定脏器称重，计算脏器系数。 （2 ）组织病理学检查：用 10%福尔马林固定，常规制定，显微镜观察病理改变。 大肠菌群的测定 一、目的要求 学习大肠菌群数的检测原理和方法。 二、实验材料 1. 样品：水样 2. 培养基：乳糖蛋白胨水（三倍，单倍），伊红美兰琼脂(EMB)平板。 3. 其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等 三、基本原理 水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。由于病原菌的数量少，检测过程复杂，因 此，直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。由于大肠菌群在粪便中数量大，在体外存 活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的 数量来作为水被粪便污染的标志。如果水中