减数分裂观察.pptVIP

植物花粉母细胞减数分裂制片技术和染色体观察 一、实验目的 掌握植物花粉母细胞减数分裂制片技术。熟悉减数分裂的具体过程。 二、实验原理 减数分裂是性母细胞在分裂形成配子过程中一种特殊的细胞分裂方式。 高等植物花粉母细胞经减数分裂产生四个小孢子，染色体数目已减半为n。小孢子进一步发育为花粉粒。 在适宜的时期采集植物的花蕾，经固定液杀死固定，使细胞保持活体时形态。然后进行压片染色等处理，在显微镜下进行观察，可以看到小孢子母细胞的减数分裂过程，研究染色体在形态和数量上的动态变化特点。 三、材料用品 实验材料：玉米雄花序 玉米PMC减数分裂永久制片和照片 仪器物品：显微镜、水浴锅、镊子、解剖针 实验药品：无水乙醇、95%乙醇浓盐酸 冰醋酸、卡宝品红或醋酸洋红。 四、实验方法与步骤 取材 固定 染色压片 镜检 1.取材： 选取适当大小的花蕾，是观察花粉母细胞减数分裂的关键性步骤。不同植物取材时期不同。 玉米：抽雄前两周（大喇叭口期），雄花序所在部位用刀片纵向划一切口，用镊子取出花序分枝。此时雄花序先端小穗颖长4mm左右，花药长2～3mm。 小麦：挑旗以后，旗叶抽出1-2cm，取出穗子。 时间一般在上午9时～10时，不同材料间稍有差异。 实验中注意观察：每一分枝是中上部还是下部小穗发育最早？ 2．固定： 取下的材料应立即放入固定液中杀死固定。 一般采用卡诺氏固定液，无水酒精：冰醋酸＝3:1，可用95％ 乙醇代替无水乙醇。 如需长期保存，可先用70%酒精冲洗2次然后转入70%酒精中保存。 注意：固定液时应现配现用，固定时不要在阳光下暴晒。 3．染色和压片： 吸去小穗过多保存液 置于载玻片中央 挑出花药，滴染液 将花药横向切断 挤压花药，使花粉母细胞从切口处逸出 取出花药壁 低倍镜检，加上盖玻片 酒精灯烤片 压片 注意不要使盖片移动 4.镜检观察 先低倍后高倍。 具体使用参见后面显微镜的使用方法。 5. 利用玉米花粉母细胞的减数分裂永久制片和照片，在显微镜下观察，并与自己的制片比较，掌握各个时期的特点。 注意： 怎样区分各个时期？ 如中I 、中I I，后I I、后I ？ 附：显微镜操作和使用 开关显微镜，移动显微镜。 调节目镜间距和目镜微调，使两个眼睛视野相同和清晰，防止眼睛疲劳。 先低倍镜，后高倍镜观察，高倍镜下不准用粗调。 高倍镜下不得取放载玻片。 使用结束：电压或光亮度调至最小，关闭并拔下电源，降低载物台，最低倍物镜或无目镜的镜筒居中，防尘罩，填写使用记录，请老师验收方可离开。 注意事项 爱护显微镜。 一次取材不要太多。 取完载玻片，盖上染色缸盖子，以免酒精挥发。 酒精灯使用注意安全。 用过的载玻片必须刷洗干净再放回染色缸，用过的盖玻片丢弃。 使用过的纱布、滤纸、盖玻片放到废品杯或垃圾桶，不得直接冲入水池。 值日生打扫卫生、检查仪器及门窗。 五、作业 1．写出制片步骤流程图。 2．制作两张质量较好的临时片，并绘出自己所制作片子的分裂相(3个以上时期），说明其时期和特点。 3. 分析自己制片操作过程中出现的问题及可能原因。 * 园艺植物遗传育种实验教学中心 园艺植物遗传学 * 减数分裂过程 (一)、间期(前间期) (二)、减数第一分裂 (三)、中间期 (四)、减数第二分裂 前期I 中期I 后期I 末期I 前期II 中期II 后期II 末期II 玉米大喇叭口期 玉米小穗 玉米雄花序 小麦挑旗期 小麦的小花 减数分裂前期 I 细线期 偶线期 偶线期 粗线期 双线期 终变期 中期 后期 后期 前期II 中期II 后期II 末期II 四分体 小孢子 调节目镜间 距和目镜微调